人胃癌细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）哪家好

实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个 
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台；

产品名称	人胃癌细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）哪家好
种属	NCI-N87
价格	来电可享受优惠

资源名称 人胃癌细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）
种属:NCI-N87
类型:胃
形态:上皮样
模式菌株:未知
培养方法
培养基:1. 人胃癌细胞NCI-N87完全培养液配方（100 ml）： 　　 RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml 　　 FBS (Gibco) 10 ml Glutamax（invitrogen 35050）
传代方法:（注：该细胞贴壁较慢，建议复苏后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。）
生长条件:气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度
生长特性:贴壁生长

收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况：
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。
人胃癌细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）哪家好具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 
注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。 
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。 
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。 
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。 
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。
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