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NAD激酶(NADK)测试盒(可见分光光度法)说明书

产品信息
  • 【细胞冻存】
    待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
    中文名称：NAD激酶(NADK)测试盒(可见分光光度法)说明书
    英文名称：NAD kinase (NADK) detection kit
    产品规格：50管/48样
    发货周期：1～3天
    发货周期：1～3天
    测定意义:
    NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。
    测定原理：
    NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；NADPH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝(MTT)，通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。
    需自备的仪器和用品：

    可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
    【培养指南】
    对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
    1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    【复苏的原则】
    产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
    细胞的种类：
    种：
    是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的Z好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
    第二种：
    是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
    质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，进口来源，保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
    细胞培养操作规程：
    一．培养基及培养冻存条件准备：
    1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
    2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
    3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
    二．细胞处理：
    1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
    2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
    对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
    方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    Enterobacter cloacae阴沟肠杆菌PCR试剂盒48T/96TELISAKitforBeclin-1-AssociatedAutophagyRelatedKeyRegulator(Barkor)半固体动力培养
    Enterobacter cloacae阴沟肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforTalpid3(Talpid3)化钠结晶紫增液
    Enterobacter cloacae阴沟肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforPolypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase12(GALNT12)化钠蔗糖琼脂IL-7(Interleukin-7)14-3-3 Alpha + Beta + Gamma + Delta + EpsilonHEN1基转移酶同源蛋白1抗体
    Enterobacter sakazaki阪崎肠杆菌PCR试剂盒IL-6R Alpha (IL6R-alpha)2,4-D缺氧诱导基因2蛋白抗体
    Enterobacter sakazaki阪崎肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒gp130/IL-6R5-HTR1A肝病毒衣壳蛋白抗体
    BR，99%96%25gOVA-sIgE25-OH-ProtopanaxdiolAnti-Phospho-PAK1(Ser199/204)/PAK2(Ser192/197)酸化p21激活激酶1/2抗体Anti-Phospho-PAK1(Ser199/204)/PAK2(Ser192/197)酸化p21激活激酶1/2抗体48T/96TIL-7Ra/CD127 peptide5-HT/5 Hydroxy Tryptophan型肝炎病毒1a基因型NS5蛋白抗体
    CD5抗体ING1/p33(inhibitor of growth gene 1)5-HTR1B戊型肝炎病毒抗体
    Potassiumthiosulfate规格：>98%,BRInhibin AlphaSynapsin IIHMG盒区内含蛋白1抗体
    Potassiumtetraoxalatedehydrate规格：>99%,BRInhibin beta A peptideRNF142血红蛋白theta亚型1抗体
    Potassiumtellurite规格：>98%,BRInhibin beta BSYT3hbs1样蛋白抗体
    NAD激酶(NADK)测试盒(可见分光光度法)说明书Anti H1N1 antibody6-邻酚
    YFV-IgG antibody4,4′-(1-基)双酚
    EB virus Rta protein IgG基叔基醚
    FcγRIIa
    Stromal interaction molecule 2醚
    growth hormone antibody二醚
    histone H2A-H2B-DNA autoantibody异醚
    fibrillin2邻二醚
    Aanti RSV Antigen antibody1,4-二氧基
    PI3K4-氧基酚
    操作步骤(仅供参考)：
    1、NAD激酶(NADK)测试盒(可见分光光度法)说明书贴壁细胞的消化
    ①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
    ②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
    ③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
    化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
    ④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
    ⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
    2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
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