产品库
登录
首页 找仪器 社区 百科 新品 供应商 品牌 应用 资料 仪企号 展会 标准 求购 招中标

人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测

产品信息
  • 原理:
    所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
    检测方法
    1.SYBRGreenⅠ法：
    在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
    SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
    PCR产物熔解曲线图
    2.TaqMan探针法：
    探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

    产品名称：人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测
    英文名称：Human Papillomavirus 12(HPV-12)
    编号：BHR1741
    规格：50T
    分类：探针法荧光定量PCR试剂盒
    储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
    运输：低温、避光，快递免费送货上门。
    内标对荧光定量PCR的影响：
    1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
    　　1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
    　　2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
    2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。

    荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
    (1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
    (2)待测样本与步骤
    (1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
    其中步骤
    (1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
    其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。
    所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
    步骤
    (2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
    其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
    几种传统荧光定量PCR方法简介：
    　　1）内参照法：
    　　人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或GX液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
    　　2）竞争法：
    　　选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或GX液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
    　　3）PCR－ELISA法：
    　　利用或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
    以下是公司正在促销打折产品:
    小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
    Human brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 人脑素/脑尿肽(BNP)ELISA试剂盒
    HumanEsogen-inducedproteinpS2ELISAKit 人雌激素诱导蛋白PS2ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
    guineapigIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒豚鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
    真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒20次
    MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit小鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
    小鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
    小鼠内脏脂肪特异性丝酸蛋白酶YZ剂(vaspin)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
    小鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
    小鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
    大鼠烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NAADP)ELISA试剂盒 ，英文名： NAADP ELISA Kit
    Mouse thrombin receptor () ELISA Kit 小鼠凝血酶受体()ELISA试剂盒
    MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 小鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
    CLIAKitforHumanCompleme4,C4ELISAKit人补体蛋白4规格：48T/96T
    细胞CASEINKINASE1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
    ELISAKitLebtospira大鼠钩端螺旋体IgG规格：48T/96T
    CREATINEPHOSPHATE嶙酸肌酸钠,四水高级白色精细粉末FROZENsigma
    (2基乙基四乙酸)
    N壬酰基N甲基葡萄糖胺shēng huà shì jì容量：100克
    录代1，1二氧基烷 Chloroccqtcldqhydq diqthyl ccqtcl 11/6/2
    四乙酸二钠 (... EDTA disodium (for molecular biology, ... 6 100G 通用试剂
    2录乙酰胺shēng huà shì jì容量：1公斤
    (维生素M))
    乳糖明胶培养基10克RT
    放现菌速 D cCTINOMYCIND 2060
    化乙酰胆碱 (培养... Acetylcholine chloride (cell culture t... 60311 25G 核酸衍生物
    人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测山达脂，英文名或英文缩写：Gum sandarac，级别：CP，98%，规格：10克
    三本基录烷;三本基基录 TriphqnylchloroMqthcnq;Trityl chloridq;ChlorotriphqnylMqthcnq 2
    5Bromo2hexylthiopxene 289
    3,4,5氧基苯 3′,4′,5′Trimethoxyacetophenone,98% 63 5G 通用试剂
    青霉素链霉素溶液/Penicillin&Streptomycin solution,γIrradiated 组织培养级，γ射线灭菌 10毫升 国产/进口


     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海博湖生物科技有限公司），内容包括 （人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （人乳头瘤病毒12探针法荧光定量PCR试剂盒检测）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
    供应商产品推荐
      您可能感兴趣的产品