PNGase F

产品名称 ：PNGase F
产品货号：ATE00005
产品规格：15000U/75000U
产品状态：Liquid
酶切反应条件：37℃ ，酶切反应1h，每1ug酶可以酶切10ug底物。
储存溶液：50 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl pH 8.0, 5 mM EDTA
表达宿主：E.coli
酶切位点：PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连接糖 (x = H 或寡 糖) 。
分子量：36kDa
纯度：>95% as determined by SDS-PAGE quantitative densitometry by Coomassie Blue Staining.
比活性：1,800,000 U/mg
酶活单位定义：1个酶活力单位指在10ul的反应体系中，37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。
存放条件：储存于 -20°C，保质期 12 个月



使用说明：
​       1. 在变性条件下进行 SDS-PAGE 的蛋白质去糖基化
​       ① 在水中加入 50μg 目标糖蛋白（或低离子强度的相容缓冲液）至体积为 12μl。
​       ② 加入 1μl 的 5％SDS。
​       ③ 加入 1μl 的 1MDTT。
​       ④ 在 95℃加热 5min 使样品变性。
​       ⑤ 在室温下冷却 5min。
​       ⑥ 加入 2μl 的 0.5M 磷酸钠缓冲液（pH 7.5）。如果 pH 在 PNGase F（pH 6-10）范围内，可以使用 其他缓冲液。
​       ⑦ 加入 2μl 的 10％NP-40。可用 Triton X-100 替代 NP-40。
​       ⑧ 加入 2μl 的 PNGase F.
​       ⑨ 在 37°C 孵育 1-3h。 注意：糖蛋白的去糖基化可以通过 SDS-PAGE 上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
​        2. 在非变性条件下进行质谱检测的蛋白质去糖基化
​        ① 在 50mM 碳酸氢铵（pH 7.8）中加入 20μg 的糖蛋白至终体积为 18μl。
​        ② 加入 2μl 的 PNGase F.
​        ③ 在 37°C 孵育 2-18h。 注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加 PNGase F 的量和延长孵育时间

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