一步法荧光定量RT-PCR MasterMix(SYBR Green)

特别提示：包括一步法荧光定量RT-PCR MasterMix(SYBR Green)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法荧光定量RT-PCR MasterMix(SYBR Green)
英文名称：2×One-Step SYBR Green RT-PCR Mix
产品货号：MT0020
产品规格：200T|5000T

本产品用于RNA的相对定量检测，采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂，可在单管中完成由RNA到定量PCR。试剂中包含热启动Taq DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、MLV、Rnase Inhibitor、SYBR Green染料等试剂预混在一起，是一种2×浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入上下游引物、RNA模板、水即可。制品中的反转录反应依赖于PCR扩增的反向引物，无需加入随机或Oligo dT引物。

本产品配有单独的ROX内参染料，使得该试剂可应用于所有RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR（Applied Biosystems)；Mx3000P（Stratagene)；LightCycler（Roche Diagnostics) ；Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

产品特点：
1．反转录和PCR单管扩增，一步完成
2．热启动酶采用化学修饰，热启动
3．单组份预混液，使用方便快捷
4．高特异性，有效YZ非特异性扩增
5．适用于所有实时定量PCR仪器

产品组成：

组分	200T×20μl	5000T×20μl
2×SYBR Green One-Step RT-PCR Mix	1ml×2	50ml
50×ROX Reference Dye	200μl	2ml

保存条件：-20℃保存，有效期三年。(经常使用，融化后可置于4℃，可保存1年。长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。)

操作方法：

1．根据机型选择步骤A或B
A：需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR（Applied Biosystems)；Mx3000P（Stratagene)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

加入物	加入量	终浓度
2×SYBR Green RT-PCR Mix	10μl	1×
50×ROX Reference Dye	0.4μl	1×
PCR Forward Primer(10μM)	0.4~0.8μl	0.2~0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)	0.4~0.8μl	0.2~0.4μM
RNA 模板	1~200ng
ddH2O	Up to 20μl

B：无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler（Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-TimePCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

加入物	加入量	终浓度
2×SYBR Green RT-PCR Mix	10μl	1×
PCR Forward Primer(10μM)	0.4~0.8μl	0.2~0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)	0.4~0.8μl	0.2~0.4μM
RNA 模板	1~200ng
ddH2O	Up to 20μl

2．进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
 

步骤	温度	时间	循环数
Stage 1:	50℃	5分钟
Stage 2:	95℃	30s
Stage 3:	95℃	10s	35~40
	60℃	30s
Stage 4:	Dissociation analysis

3. 反应结束后确认 Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

我公司销售的一步法荧光定量RT-PCR MasterMix(SYBR Green)，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。