动物源性饲料DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括动物源性饲料DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：动物源性饲料DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：DNA extraction kit from animal-derived feedstuffs
产品货号：WH0023
产品规格：50次|200次

本试剂盒可从多种动物源性植物饲料或动物组织中提取基因组DNA。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规操作，包括PCR、荧光定量PCR等饲料安全检测应用。

产品特点：
·针对性强：与饲料检疫部门合作开发的专项产品。
·应用广泛：可用于多种饲料和动物组织。
·得率高、检测灵敏度高：可从50mg饲料中提取到500ng-40μg基因组DNA，检测灵敏度可达0.1%。

试剂盒组成：

组分	50T	200T
缓冲液GA	30ml	2×50ml
缓冲液GB	30ml	2×50ml
缓冲液GD	13ml	52ml
漂洗液PW	15ml	50ml
洗脱缓冲液TE	15ml	60ml
Proteinase K	1ml	4×1ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配试剂：RNase A（100 mg/ml）（目录号:WH0217）。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。
2．所有离心步骤均为室温下离心。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料：
  50mg研磨粉碎的动物源性饲料加入320μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
  注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）（客户自备，目录号：WH0217）溶液，振荡15 sec，室温放置5 min。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。在65℃放置20-30 min，其间混匀样品2-3次。
3．加入340 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，65℃放置10min，其间混匀样品2-3次。
  注意：如果第2、3步中65℃温浴期间离心管底出现沉淀，请将沉淀振荡至彻底悬浮后再进行65℃水浴操作。
4．12000rpm （~13400×g)离心2 min，取440 μl上清至新管中。
  注意：若所取上清中有可见悬浮颗粒，请重复步骤4一次，否则颗粒物质会堵塞吸附柱。
5．向上清中加入220 μl无水乙醇，充分颠倒混匀6-8次，此时可能会出现絮状沉淀。
  注意：若所取上清体积小于或大于440 μl，则无水乙醇应加到上清体积的1/2。例如：取500 μl上清，加入250 μl无水乙醇。
6．将上一步所得溶液和絮状沉淀全部加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
  注意：离心时间请不要少于2 min，否则可能会导致吸附柱堵塞，如果离心时出现吸附柱堵塞情况时，请再次12000rpm（~13400×g)离心2 min。
7．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
8．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
9．重复操作步骤8。
10．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min。
  注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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