血液基因组DNA大量提取试剂盒（硅胶膜离心柱法）

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*，细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于未凝固全血，以及经各种抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸）处理过的全血样本。一次可从5-10 ml全血中提取到30-200 μg高纯度基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀ =1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA，要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA，建议选择Quick血液基因组DNA提取试剂盒。

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

保存条件

蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇，即75 ml漂洗液PE加入225 ml无水乙醇，100 ml漂洗液PE加入300 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生，在55℃加热溶解，待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。
● 柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起YZ作用。采血时如没有特殊要求，请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

● 基因组DNA的得率，会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

● 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

● 所有离心步骤均为室温下进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  取血液样本，每5-10 ml血液加入到一只50 ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。涡旋振荡或上下来回颠倒混匀，室温放置15min。 5,000 rpm离心3min，弃上清，收集白色或淡红色沉淀，重复上述步骤，注意不能把沉淀倒掉。

● 如沉淀仍然呈深红色，表明红细胞裂解不充分，可再加等体积红细胞裂解液RS处理一次。

   ● 对于哺乳动物全血，每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA，因其血液中红细胞有细胞核，血液用量勿超过500 μl/离心管。每500 μl全血中可提取1000 μg的基因组DNA。

2  加入5 ml消化缓冲液DS，涡旋振荡至形成完全均一的悬浮液。

   ● 如需去除RNA，可加入100 μl RNase A（100 mg/ml，N9042），振荡15秒，室温放置5min。

3  加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS，涡旋振荡混匀，65℃温浴15min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。

   ● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。       

4  加入5.5 ml无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，12,000rpm离心1min，弃滤液。

● 若溶液体积大于DNA纯化柱的容积（700 µl），可分两次离心。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5  加入10 ml去蛋白液PS，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

  ● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量的基因组DNA。

6  加入10 ml漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

 ● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

7  加入10 ml漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

9  将纯化柱置于新的50ml离心管中。向纯化柱ZY处，悬空滴加600-1000 μl洗脱液TE，室温放置2min。

10  12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA，-20℃保存。

   ● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视DNA含量多少、用户对DNA浓度要求而定。

● 对洗脱液TE 65℃预热，会提高基因组DNA的产量。