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铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

产品信息
  • 铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
    铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
    产品说明
    致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增,仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化,自动判读结果。本产品用于铜绿假单胞菌的检测。检出限为 103 CFU/ml
    产品组成(48 测试)
    试剂 含量
    A-PA-I 1200μL × 1
    B-I 55μL × 1
    C-I 1200μL × 1
    NG-I 50μL × 2
    PG-PA-I 50μL × 1
    适用仪器
    Dhelix 1610Dhelix 3210ESE Tube ScannerGenie IIDeaou-308c 等恒温荧光检测仪,ABI 7500LightCycler480CFX 96 等荧光 PCR 仪。
    自备耗材和仪器
    灭菌 1.5mL 2.0mL 离心管;灭菌 0.2mL PCR 管或八联管;冰盒;移液器(0.5-10μL10-100μL100-1000μL)及配套灭菌吸头;离心机;涡旋混匀器;金属浴

    注意事项
    1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
    1)区:试剂准备区。
    2)第二区:样本制备区。
    3)第三区:模板添加区。
    4)第四区:扩增及产物分析区。
    分区之间Z好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
    2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
    3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
    4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
    5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
    6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
    7. 检出限为 10
    3 CFU/ml 是以 1 ml 10
    3CFU/ml 增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组 DNA 作为模板。
    样品处理
    参照《SN/T2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法》中的 7.1 7.2 处理样品,对样品进行前增菌,制备的菌液保存待用。
    如为冷冻样品,应于 2~5℃解冻,且不超过 18h,若不能及时检验,应置于小于-15℃保存,非冷冻的易腐样品请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月。
    应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于 4℃冰箱保存,并在 24h 内检验。
    按无菌操作取检样 25 gml)样品至 225 ml SCDLP 增菌液中,充分摇匀,于 36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
    实验操作
    将试剂完全解冻,各组分离心 30s
    1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
    若有 N 个待检样品,则参照下表,按照 N+2 个数量计算各组分用量(N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照),将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中,涡旋混匀,离心 30 秒,分装于 0.2ml PCR 管中,并向每管加入 1C-I(约 20μl)。
    试剂 使用量
    A-PA-I 22×(N+2)μL
    B-I 1×(N+2)μL
    反应液总体积 23×(N+2)μL
    2.模板制备(样本制备区)
    建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品,具体过程详见产品说明书。
    3.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
    在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μL 模板,顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-PA-I。涡旋混匀 30s,离心 1min,立即进行扩增反应。
    4. 扩增反应(扩增及产物分析区)
    恒温仪器 63℃条件下反应 30min
    若使用荧光定量 PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s63℃ 45 s 作为一个循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,30 个循环。
    其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
    结果判定
    仪器自动判定结果,若显示阳性,则样品中含有铜绿假单胞菌;若显示阴性,则样品中不含有铜绿假单胞菌或含量低于检测限。
    在荧光定量 PCR 仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有铜绿假单胞菌;若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有铜绿假单胞菌或含量低于检测限。
    ★ NG 反应管结果显示阴性PG 反应管结果显示阳性,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。
     
    温馨提示:不可用于临床ZL。
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