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GX率扩增PCR预混液 Plus Mix 1ml×5 P2032

产品信息
  • Plus MixCat. #：P2031，P2032

    产品简介
    Plus Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Taq Plus DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）。同时，由于体系内含有优化剂与增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有两种末端：平末端与3'-dA。
    Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶与Pfu DNA聚合酶的独特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍，扩增片段的长度可达20 kb（简单模板）。在扩增复杂模板（如GC-rich或重复序列）时，Taq Plus DNA聚合酶的扩增效率高于Taq DNA聚合酶，延伸速度为20s/kb（70~75℃，简单模板可达5s/kb）。可用于复杂模板的PCR扩增。
    产品组成
    Component P2031 P2032
    2× Plus Mix  1 ml 1 ml× 5 
    超纯水  1 ml 1 ml× 5
    本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
    保存条件
    -20℃保存2年。
    质量控制
    纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
    功能检测：PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
    应用举例
    1. 配制反应体系
    请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：
    Ordinal Component Volume
    (50 μl reaction volume)    		 Final concentration
    (50 μl reaction volume)
    1 2× Plus Mix 25 μl 1×
    2 upstream primer (10 μM)[1] 2 μl 0.4 μM
    3 downstream primer (10 μM)[1] 2 μl 0.4 μM
    4 template DNA[2] 1-4 μl <1μg
    5 超纯水[3] To 50 μl -
    optional MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[4] Variable -
    [1] 引物终浓度建议范围：0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度，效率低时可提高浓度。
    [2] 不同模板用量不同，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应体系）。
    Template 人类基因组DNA λDNA 大肠杆菌基因组DNA 质粒DNA
    Dosage 0.1μg-1μg 0.5ng-5ng 10ng-100ng 0.1ng-10ng
    [3] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。
    [4] 可单独订购25mM MgCl2（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。
    1. 设定反应程序进行PCR反应
    Stage Temperature Time Number of Cycles
    Initial Denaturation 94℃ 3 min 1
    Denaturation 94℃ 30 sec 25-35
    Annealing 55-68℃[1] 30 sec
    Extension 72℃ Variable[2]
    Final Extension 72℃ 5-10 min 1
    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。
    [2] 延伸时间按20s/kb来设（简单模板可达5s/kb）。
    1. 分析结果
    反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要，可进行割胶回收。
    无产物或产物量少的改进措施有：1调整退火温度；2减少YZ剂的影响，如提取的基因组DNA中含有YZ扩增的成分，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脱，提高模板DNA的纯度；4使用PCR添加剂，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl2（Cat. #：P9031）等可提高产量。
    操作注意事项
    1 室温下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA。
    2 Taq Plus DNA聚合酶的扩增产物有两种末端：平末端和3'-dA突出末端。如要进行TA克隆，请先进行加A反应，以提高克隆效率。（加A反应：参考如下体系，72℃，15-30min）
    PCR（纯化）产物 1-7 μl
    10× Taq Buffer（Mg2+ Plus） 1 μl
    dATP 0.2 mM
    Taq DNA聚合酶 5U
    超纯水 To 10 μl
    引物设计注意事项
    引物长度一般在15-30个碱基之间；上下游引物3’末端避免互补，避免出现3个以上重复的G或C，或出现发夹结构，否则会产生非特异性扩增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量尽量接近；Tm值控制在55-65℃之间，且上下游引物Tm值尽量接近，额外附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，不参与Tm值计算。
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    温馨提示：不可用于临床ZL。

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