原核重组蛋白表达纯化

产品图片说明：原核表达  Ni-NTA纯化

大肠杆菌ArcticExpress表达系统简介ArcticExpress (DE3)来源于E. coli，endA1突变型、Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，有效提高质粒和表达蛋白的稳定性，适用于pET、pGEX，pMAL等蛋白表达载体。由于整合了嗜冷菌Oleispira antarctica [cpn10cpn60 Gent^R]基因，可表达低温仍具有活性的Cpn10和Cpn60伴侣蛋白，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，与传统的原核伴侣蛋白GroEL、GroES等相比，具有更高的促溶能力。
pWJ载体是我们自主构建的GX载体，使得可溶性蛋白表达量高达50-800mg/L。同时该载体与ArcticExpress (DE3)配合使用，可在11℃有效表达目的蛋白，尤其适用于生物活性要求高的蛋白和酶表达。
  原核表达案例本案例基于原核表达 体系，通过RNA提取RT-PCR获得目标基因序列（未进行密码子优化），Gilson Assemble构建pWJ-目标蛋白-HIS表达载体，转化大肠杆菌表达，SDS-PAGE检测蛋白表达，确认表达后进 行扩大培养，Ni-NTA纯化获得蛋白。
案例调研：客户耗时5年，换用不同菌株、不同温度、不同诱导剂浓度始终检测不到原核蛋白  表达，客户需要具有生物活性的蛋白用于结晶和共结晶实验。该蛋白为人源蛋白，自然状态下为分泌型表达，688个氨基酸，74.3kD，含有3对二硫键，稀有密码子较多；蛋白高级结构含有复杂的Q环等。
表达方案设计：通过对目标序列进行完整的分析后，决定使用蛋白自身的全部核酸序列和信号肽序列，无需密码子优化，使用我们自行设计的pWJ，构建C端HIS表达载体，低温表达，同时使用我们自行优化的培养基配方，过夜表达。
表达鉴定：表达1ml小样，离心收集菌体后重悬于1ml PBS中，吸取6μl菌液与6μl 2× loading buffer混合，95℃水浴5min，12%SDS-PAGE分析。下图中间泳道箭头指示处为目标蛋白表达，左侧泳道为未诱导的菌液显示无表达。服务特色蛋白表达条件优化、表达蛋白的生物活性保证及其它特殊需求（如标签去除、内毒素去除等）。
可提供原核和哺乳表达系统，根据实验需求，可选用不同标签His,Trx，GST,SUMO等以满足实验需求。
能够保证蛋白具有生物学活性。
 注意事项1. 蛋白为液体冷冻状态运输，避免反复冻融；保存浓度>1mg/mL。
2. 推荐-80℃保存，特殊说明除外。
3. 哺乳表达系统适用于10kD-120kD的蛋白；<10kD蛋白，可添加Fc等标签融合表达；>120kD的蛋白，昆虫表达系统具有一定优势。
4. 适用于分泌蛋白和膜蛋白的胞外段。
5. 如需使用pcDNA系列质粒，推荐使用293T细胞。