裸鼠成瘤

裸鼠成瘤模型

由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情况下，不排斥来自异种动物的组织移植，因此，可用其建立理想的人类肿瘤可移植实验动物肿瘤模型。

实验步骤

1.细胞复苏

从液氮中取出冻存的U87-MG细胞，迅速放入37℃水浴箱中，快速融化，加入含10%胎牛血清的DMEM/High培养基，接种于T25 培养瓶中，37℃，5％CO2孵箱常规培养传代。

2.细胞传代培养

弃培养瓶中旧培养液，用无菌PBS冲洗两遍，将胰蛋白酶-EDTA 1 ml加入到培养瓶中消化细胞，倒置相差显微镜下观察，待镜下细胞出现筛网状空隙时倒掉胰酶，加入含10%胎牛血清的DMEM/High培养基至覆盖培养瓶底，移液管反复吹打，使细胞悬浮，将细胞悬液移入离心管中1000r/min离心5min，弃上清液，按1:2~1:4传代，在37℃、5%CO2孵箱进行培养，2~3天换液，选择对数期的细胞用于实验。

3.接种制备

加入无菌PBS，轻轻吹打细胞沉淀，混匀成细胞悬液，细胞计数，使细胞密度达到 1×107个/ml；在超净台中，用75%酒精消毒裸鼠背部，于皮下（大部分选择腋下接种）注射0.1 ml细胞悬液。

4.结果观察

一般接种7-10天左右可以见到皮下开始出现肿块。

注意事项

1.接种细胞的选择：取处于对数生长期的细胞。细胞的状态是成瘤实验的关键，细胞达80-90%左右密度为宜。细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。

2.裸鼠的选择：选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右；种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部；左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴进行保定。

3.接种方式：接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率；接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

4.结果判定：肿瘤大小测量一般为1周两次，用游标卡尺测量瘤体Z长径(a)和Z短径(b)，按公式计算肿瘤体积(V)的大小，V(mm3)=1/6πab²。

服务项目

可包含裸鼠的购买、饲养、造模、取材及后续指标的检测等。

实验流程

裸鼠饲养→细胞培养→模型制备→结果判定