Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors） 免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶YZ剂）

免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶YZ剂）（Lysis Bufferfor WB/IP Assays without enzyme inhibitors）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为20mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，不含蛋白酶、磷酸酶等YZ剂，可广谱且有效YZ蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于PAGE，蛋白免疫印迹（WesternBlot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA，以及许多兼容1% Triton X-100的酶活性或生物分子的检测。使用本品，研究人员可根据具体用途添加YZ剂或不添加YZ剂。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：MP1902-500T）测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。保存：-20℃冻存，1年稳定。1）若频繁使用本品，可以短期4℃保存。若不是频繁使用本品，建议次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。2）若需添加蛋白酶或磷酸酶YZ剂，可使用我司的广谱蛋白酶YZ剂混合物（#MP1610），广谱磷酸酶YZ剂混合物（#MP1612），以及PMSF（#MP1601），或者自行准备。3）裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。A， 培养的细胞样品1） 充分融解WB/IP裂解液（无蛋白酶/磷酸酶YZ剂），之后混匀。取适当量的裂解液，根据具体用途添加适当的YZ剂或不添加。悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团细胞较难裂解充分，而少量细胞由于裂解液和细胞充分接触，相对来说容易裂解充分。3） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等实验。【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。1） 将组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱冷冻30分钟以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程控制在1-2分钟内，以减少蛋白的降解。