Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液

本免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（Lysis Buffer for WB/IP Assays）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为20mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，EDTA和抑肽酶等多种YZ剂，可广谱且有效YZ蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于PAGE，蛋白免疫印迹（WesternBlot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：MP1902-500T）测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。产品组成保存与运输方法 1）为了取得的使用效果，建议次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。2）裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。A， 培养的细胞样品1） 充分融解WB/IP裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（100mM），使其浓度为1mM。悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团细胞比较难裂解充分，少量细胞则由于接触充分，先对比较容易充分裂解。3） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫共沉淀等实验。【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。1） 将组织剪切成细小的碎片。