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Clostridium difficile艰难梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

产品信息


  • PCR使用注意事项
    1. 试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer,  LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
    2. 配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。
    3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
    4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。


    步骤、过程：
    构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。
    如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除。
    探针的切除将会引起：
    将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号。
    将探针从目的链上去除，使引物继续沿模板链末端延伸。因此，探针的介入并不会YZ整个PCR过程。
    内源性对照：
    数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量，研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。
    标准品：
    因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子计数，所有无需标准品。 由于样品量会除以校准品的量，所以标准曲线中的单位便被去除了。因此，对于标准品来说，只需知道其相对稀释比。对于相对定量，任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。

    每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海泽叶生物科技有限公司），内容包括 （Clostridium difficile艰难梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （Clostridium difficile艰难梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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