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副溶血性弧菌PCR试剂盒

产品信息

  • PCR使用方法：
    一、样品 DNA 的制备
    1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
    2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂SY装。则按下面步骤操作：
    3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
    管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但Z好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
    4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
    5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
    6. 95℃保温 10 分钟。
    7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

    二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）  
    8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果次使用DNA 释放剂，Z好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
    成份 样品（用量1） 样品（用量2） 阳性对照 阴性对照
    即用型 PCR Mix 3.0 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
     PCR 引物混合液 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
    制备的样品 18 uL 2 uL 无 无
    样品制备阳性对照 不加 不加 2 uL 不加
    样品制备阴性对照 不加 不加 不加 2 uL
    超纯水 不加 16 uL 16 uL 16 uL

    9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
    过程 温度 时间
    预变性 94℃ 10分钟
    PCR 反应
    （35 个循环）    		 94℃ 45s
    56℃ 45s
    72℃ 45s
    延伸 72℃ 5分

    10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海康朗生物科技有限公司），内容包括 （副溶血性弧菌PCR试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （副溶血性弧菌PCR试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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