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DNA Ligation Kit <Mighty Mix> 6023 TAKARA

产品信息
  • 3-cDNA合成 & 克隆
     
    制品内容 (Code No.: 6023) 
    Ligation Mix 150 μl × 5
    按每次反应使用7.5 μl 进行计算,可使用100次。
     
    ■ 制品说明
    DNA片段连接反应频繁用于基因工程实验操作中。DNA的连接通常使用T4 DNA Ligase,但DNA片段的末端形状对T4 DNA Ligase连接反应速度影响很大。因此,根据DNA片段末端形状需要调整酶的添加量和反应时间。本公司研发的DNA Ligation Kit,不需要调整酶添加量和反应时间,可简便、快速地进行DNA连接反应。
    DNA Ligation Kit〈Mighty Mix〉是以往DNA Ligation Kit 的升级产品,连接效率高。本制品具有以下特点:
    1) 预混型
    是酶和Buffer的预混型试剂,只需在DNA中加入Ligation Mix溶液即可GX完成连接反应,操作简便。本制品反复冻融后,反应性能仍然稳定。
    2) 也适用于平滑末端和TA克隆
    不仅适用于粘性末端连接,也可以GX地进行平滑末端的DNA连接和TA克隆。
    3) 连接反应仅需5分钟
    25℃反应5分钟即可完成插入片段与质粒载体的连接,节省实验时间。
     
    DNA Ligation Kit的反应液量和反应条件
    克隆编号 DNA溶液:Ligation Mix (体积比) 反应条件
    [1] 质粒载体中插入外源DNA片段
    [标准操作流程]
    [快速操作流程]
    1:1
     
    16℃,30分钟
    25℃,5分钟
    [2] PCR产物的T载体克隆 1:1 16℃,30分钟
    [3] 线性DNA的分子内连接 (自身环化) 1:1 16℃,30分钟
    [4] Linker Ligation,Adaptor Ligation质粒载体中插入linker DNA cDNA与连头 (Linker、 Adaptor) 连接
     
    1:1
    1:2
    16℃,30分钟
    [5] λ噬菌体中插入外源DNA片段(体外包装) 1:2 26℃,10分钟
    * 说明书提供的实验结果是表中使用DNA Ligation Kit获得的实验数据,仅供参考。
     
    ■ 保存
    -20℃。使用前在冰上融化 (5-10分钟),吸打混匀。已证实反复冻融50次对反应性能没有影响。
     
    ■ DNA Ligation Kit的操作原理图
     
     
    ■ 使用注意
    1. DNA Ligation是-20℃保存的冷冻品,反复冻融不会失活。使用前在冰上融化,吸打混合。
    2. 使用本试剂盒获得的DNA连接反应液,可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如果进行聚bxxa凝胶电泳时,建议乙醇沉淀后再进行电泳。
    3. DNA连接反应液直接进行苯酚抽提时,反应液会出现白色浑浊。
    4. DNA连接反应后进行乙醇沉淀处理时,向反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇,-20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟后,4℃离心回收DNA。DNA含量较少时,加入Carrier使沉淀效果更好。
     
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    温馨提示:不可用于临床ZL。
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