Human/Canine/Porcine Insulin ELISA Kit

检测步骤
检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。 
1)准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。 
2)将不需要的板条拆卸下来，放回装有干燥剂的铝箔袋，重新封好封口。 
3)浸泡酶标板：加入300 μl 1×洗液静置浸泡30 秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后，在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。 
4)加标准品：标准品孔加入 100 μl 2倍倍比稀释的标准品。空白孔加入 100 μl 标准品稀释液(血清/血浆样本)或培养基(细胞培养上清样本)。 
5)加样本：血清/血浆：样本孔加入 80 μl 1×检测缓冲液和20 μl 样本。细胞培养上清：样本孔加入 100 μl 细胞培养上清。 
6)加检测抗体：每孔加入50 μl 稀释的检测抗体(1:100 稀释)。保证步骤 4、5、6 连续加样，不要间断。加样过程在 15 分钟内完成。 
7)孵育：使用封板膜封板。300 转/分钟振荡，室温孵育 1.5 小时。 
8)洗涤：弃掉液体，每孔加入 300 μl 洗液洗板，洗涤 6 次。每次洗板，在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能，必须彻底移除残留液体。 
9) 加酶孵育：每孔加入 100 μl 稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(1:100 稀释)。 10) 孵育：使用新的封板膜封板。300 转/分钟振荡，室温孵育 30 分钟。 
11) 洗涤：重复步骤 8。 
12) 加底物显色：每孔加入 100 μl 显色底物 TMB，避光，室温孵育 5 - 30 分钟。 
13) 加终止液：每孔加入 100 μl 终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀，请轻轻叩击板框，充分混匀。 
14) 检测读数：在 30 分钟之内，使用酶标仪进行双波长检测，测定 450 nm 吸收波长和 570 nm 或 630 nm 参考波长 下的 OD 值。校准后的 OD 值为 450 nm 的测定值减去 570 nm 或 630 nm 的测定值。仅使用 450 nm 测定会导致 OD 值偏高，并且准确度降低。

此操作步骤为参考  每个指标稍有不同，具体详见本试剂盒说明书！