大小鼠人Spectrinαchain,non-erythrocytic1免疫组化试剂盒

产品名称：大小鼠人Spectrinαchain,non-erythrocytic1免疫组化试剂盒
产品别名：Histostain-SP Kit; Histostain-SP (Streptavidin-Peroxidase)kit.
规格价格：假设IHC工作液每个样品用量为100ul来计算，按照稀释比例1:400来计算，本试剂盒中一抗规格50ul至少可以检测200个样品。
保存条件：不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃，其他均保存 2-8 ℃

大小鼠人Spectrinαchain,non-erythrocytic1免疫组化试剂盒特点：利用LAB-SA第二代技术生产的免疫组化检测试剂，特点是高灵敏度，特异性强、定性定位准确、背景清晰等、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片。可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。

温馨提示：本检测试剂盒适用于大鼠，小鼠，人等绝大数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织（如肾脏、肝脏等），应选用非生物素检测系统，或用avdin 封闭。

大小鼠人Spectrinαchain,non-erythrocytic1免疫组化试剂盒试所含试剂：
1、一抗：Spectrinαchain,non-erythrocytic1抗体
2、无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂
3、试剂A：封闭用正常山羊血清工作液
4、试剂B：生物素标记二抗工作液：生物素标记羊抗兔IgG
5、试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液
6、显色液D液 (棕色) 1ml
7、显色液E液（白色）20ml

用户自备试剂（用户自行购买，亦可咨询我公司客服购买）：
一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)缓冲液：
PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠等。
二、柠檬酸钠抗原修复液：
可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲quan、甲quan或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
抗原修FF法：
方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温。
方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。
方法3：高压修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于高压锅，上汽后修复2-5min，然后将高压锅置入凉水中，减压至正常后取出玻片
抗原修复注意事项：
1）脱蜡水化的切片，应避免因切片干燥，而至非特异性染色。
2）热修复操作时务必谨慎，当心烫伤。
3）热修复时间过长易导致脱片，请注意控制时间。
三、DAB（二氨基联本胺）染色液：
过氧化物酶将使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

实验前准备：
一）一抗稀释的准备：方法1. 实验前，将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释（或PBS稀释），将稀释后的抗体分装5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反复冻溶。
方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul（或PBS稀释50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。
方法3. 预试验可做几个梯度1：100、200、400背景高还可做上去，选一个适合的稀释比例，再正式做，效果Z好。工作液的稀释-使用抗体稀释液。
二）DAB显色液的制备实验准备：在1毫升试剂E（DAB 底物液）中，加入1滴（约50微升）试剂D（DAB浓缩液），混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，6小时内使用，剩余的液体应弃去。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

大小鼠人Spectrinαchain,non-erythrocytic1免疫组化试剂盒实验步骤（建议方案）：
1、石蜡切片，常规脱蜡至水
2、蒸馏水冲洗，pbs 浸泡5 分钟（如需采用抗原修复，在此步骤后进行）。
3、3%双羊水去离子水（无色液体）孵育15-20 分钟，以消除内源性过氧物酶活
性。
4、滴加试剂A（蓝色液体）室温孵育15-20 分钟，倾去，勿洗。
5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。
6、PBS 冲洗，3 分钟3 次。
7、滴加试剂B（黄色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。
8、PBS 冲洗，3 分钟3 次。
9、滴加试剂C（橙色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。
10、PBS 冲洗，3 分钟3 次。
11、显色剂显色（DAB 或AEC）
12、自来水充分冲洗。
13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。
14、选择适当的封片剂封片。

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