双荧光素酶系统

1.启动子质粒构建及验证
简介：
       启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA转录合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。  
       启动子预测是指根据基因信息，启动子区域各种转录信号，如TATA 盒、CCAAT 盒等保守序列及信号间保守的空间排列顺序的识别对未知启动子位置进行预测。
       根据相关预测，从基因组中调取预测的启动子序列，将其构建至报告载体中，通过检测报告基因来分析启动子关键区域；同时构建分段克隆启动子和定点突变从而确定转录起始位点。
 
服务流程：
                                                          


相关要求(客户提供)：
1. 研究用细胞或组织；
2. 检测的指标；
3. 请客户提供DNA结合蛋白详细相关信息或相关文献。
 
结果：
       电子版启动子测序结果；含有启动子的报告基因载体；启动子活性验证结果；具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；原始实验图片。

2.染色质免疫沉淀（ChIP）
原理：
      在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与 目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。
               
客户提供：
1. 研究用细胞或组织；
2. 检测的指标；
3. 请客户提供DNA结合蛋白详细相关信息或相关文献。
 
结果：
1. 阴性对照结果；
2. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
3. 原始实验图片及数据。


3.EMSA
原理：
      EMSA是检测蛋白与DNA形成复合体并直接相互作用的技术方法，可用于定性和定量分析，能够更准确的判断蛋白与DNA的特异性结合序列，因此蛋白-DNA复合体的识别在研究基因的表达调控中具有重要作用。这一技术Z初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素或生物素标记的DNA或RNA探针共孵育，在非变性聚丙酰胺烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异)，和其它非相关的片段(非特异)，来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
                   

实验流程：
1. 样本数(泳道)设定及浓度梯度实验设计
2. 3'生物素探针设计及合成
3. EMSA电泳凝胶配置
4. 电泳分离复合物和非结合的探针
5. 紫外交联
6. EMSA反应物电泳检测
7. 实验分析及报告
 
相关要求(客户提供)：
1. 细胞核蛋白提取物或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白，每张膜至少提供50uL，浓度>0.5mg/ml。
2. 探针序列，如需设计，请客户提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献。
 
结果包括：
1. 实验合成生物素标记探针；
2. 非标记探针（竞争性EMSA）；
3. 剩余目的蛋白和抗体；
4. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
5. 原始实验图片及数据。