小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书

小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书Mouse Tubular PrimaCell: Normal Smooth Muscle Cells
   肾小管的生理功能有三方面，物质的重吸收和排泌功能,如钠、钾、氯、钙等电解质,蛋白质、氨基酸、葡萄糖的吸收和排泌;尿液的浓缩稀释;泌氢和尿液酸化。其中，小鼠肾小管平滑肌细胞呈长梭形，无横纹，细胞核一个，呈长椭圆形或杆状。小鼠肾小管平滑肌细胞传3-5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 虽然肾小管平滑肌组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的肾小管平滑肌组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的肾小管平滑肌组织片能使得肾小管平滑肌细胞的一些功能
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
以下是小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书产品信息的认购信息：

产品名称	小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书
英文名称	Mouse Tubular PrimaCell: Normal Smooth Muscle Cells
价格	来电可享受优惠

小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

 Cefathiamidine 头孢硫脒；先锋霉素18号 质量规格：>97%,BR 33075-00-2
 H-D-Ser-OH D-丝氨酸 质量规格：>98%,BR 312-84-5
 D-Serine methyl ester hydrochloride  D-丝氨酸甲酯盐酸盐 质量规格：>98%,BR 5874-57-7
 H-D-Thr-OH D-苏氨酸 质量规格：>98%,BR 632-20-2
 D-Tryptophan methyl ester hydrochloride D-色氨酸甲酯盐酸盐 质量规格：0.98 14907-27-8
 N-Acetyl-D-tryptophan  N-乙酰-D-色氨酸 质量规格：0.98 138798
 H-D-Tyr-OMe·HCl D-酪氨酸甲酯盐酸盐 质量规格：0.99 3728-20-9
 2'-O-Methyladenosine 2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷 质量规格：>98%,BR 2140-79-6
 D-Valine D-缬氨酸 质量规格：>98%,BR 640-68-6
 2'-Deoxy-3'-guanylic acid disodium salt 2'-脱氧鸟苷-3'-单磷酸二钠 质量规格：>98%,BR 102814-03-9
小鼠肾小管平滑肌细胞培养试剂盒说明书 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Adenosylhomocysteinase
 31.2-2000 pg/mL 人白介素-37(Interleukin-37)ELISA试剂盒
 0.312-20 ng/mL. 肾上腺皮质酮(Cortisone)ELISA试剂盒
 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human High affinity copper uptake protein 1
 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Periostin
 15.6-1000 pg/mL 人整合素β1，ITG β1 ELISA试剂盒
 0.78-50 ng/mL 人T-细胞表面糖蛋白CD4(T-cell surface glycoprotein CD4) ELISA试剂盒
 0.312-20 ng/mL 人氨肽酶O(AP-O)ELISA试剂盒
 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Transcription factor GATA-5
 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human E3 ubiquitin-protein ligase TRIM22
 0.312-20 nmol/mL 甘油三脂(Triglyceride)ELISA试剂盒