SW 962人阴户磷癌细胞系 专业传代培养技术指导

SW 962人阴户磷癌细胞系 专业传代培养技术指导
Wort琼脂基础，英文名：Wort Agar Base，用途：麦芽汁琼脂基础,用于真菌计数,每100ml添加0.235g甘油
L-WRN细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1417[H1417]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Ca9-22细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OVCAR10细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Skirrow琼脂基础(Skirrow血琼脂基础/改良Skirrow琼脂基础)，英文名：Skirrow Agar Base，用途：用于弯曲菌选择性分离
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE)，英文名：Trypticase Soy-Yeast Extract Broth，用途：用于单核增生李斯特氏菌的培养
Calu-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化20分钟。1：2。5-6天长满。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂，英文名：VRBA-MUG，用途：用于大肠杆菌平板计数
SU-DHL-16细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
FHs 74 Int细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒，英文名：Human CCK ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠组酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒，英文名：HRG ELISA Kit，规格：48T/96T
K7M2wt细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OC-3-VGH细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
Amies运送培养基，英文名：Amies Transport Medium，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存
肠球菌推定肉汤(EP肉汤)，英文名：Enterococci Presumptive Broth，用途：——用于水中肠球菌的分离和鉴定
乳酸杆菌选择性肉汤(LBS肉汤)，英文名：Lactobacillus Selective Broth，用途：用于乳酸菌的选择性培养,每升需添加1.32ml冰乙酸
大鼠蛋白激酶B(PIKBa)ELISA试剂盒，英文名：PIKBa ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠Ⅰ型胶原交联基端肽(NTXⅠ)ELISA试剂盒，英文名：Mouse NTXⅠ ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
小鼠肝细胞核因子6(HNF6b)ELISA试剂盒，英文名：Mouse HNF6b ELISA Kit，规格：48T/96T
改良GC肉汤基础，英文名：Modified Giolitti-Cantoni Broth Base，用途：用于葡萄球菌MPN计数,需添加0.1ml1%亚碲酸钾溶液(1%亚碲酸钾溶液)
盐肉汤，英文名：Nitrate Broth，用途：用于盐还原试验
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结1：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结2：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝换课题，这个见得太多了，别不当会事。
GVPC琼脂基础，英文名：Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base，用途：用于军团菌选择性分离
细胞背景资料：详见相关文献介绍
胆汁七叶苷琼脂(BEA)，英文名：Bile Esculin Agar，用途：用于肠球菌确证和培养
SK-MEL-31细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：4-1：6传代，2-3天换液1次。
TE10细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Calu-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化20分钟。1：2。5-6天长满。
SUM102PT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BG 11海洋琼脂培养基基础，英文名：Medium BG 11 for Marine Cyanobacteria，用途：用于海洋蓝细菌的培养，每100ml添加1支维生素B12溶液
改良桑塔基氏培养基基础(含2.5%NaCl)，英文名：Starkey,s Medium Base, Modified with 2.5% NaCl，用途：用于脱肠菌属和脱弧菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
营养琼脂(NA)，英文名：Nutrient Agar，用途：用于细菌的纯化和培养
KMS26细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NRK-52E细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
NCI-H64[H64]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
麸皮液体培养基，英文名：Wheat Bran Medium，用途：用于细菌、真菌的培养
胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)，英文名：Tryptone Physiology Solution，用途：用于样品的制备
沙氏葡萄糖琼脂培养基(含抗生素)，英文名：Sabouraud-glucose Agar with antibiotics，用途：用于霉菌、酵母菌的分离和培养
细胞形态特性：详见细胞说明书
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
人刀豆素A(ConA)ELISA试剂盒，英文名：Human ConA ELISA Kit，规格：48T/96T
Iso-Sensitest 琼脂，英文名：Iso-Sensitest Agar，用途：用于抗生素药敏试验
Rustigian氏尿素培养液，英文名：Rustigian Urease Test Medium，用途：用于细菌尿素试验
小鼠ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ADAMTS4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠环指蛋白4(RNF4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse RNF4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人黏病毒耐药蛋白1(MX1)ELISA试剂盒，英文名：Human MX1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
化镁孔雀绿增菌液(RV/MM)，英文名：Rappaport-Vassiliadis Medium，用途：用于沙门氏菌选择性增菌
Balb/3T3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
PHM82细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SUM159细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
K7M2 wt[K7M2-WT]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。