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HTB-9人膀胱癌细胞系 专业传代培养技术指导

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  • HTB-9人膀胱癌细胞系 专业传代培养技术指导
    盐蛋白胨水培养基,英文名:Nitrate peptone water Medium,用途:用于细菌的盐分解试验
    RPMI 6666细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮生长 ;细胞形态特性:淋巴母细胞样;细胞传代方法:3-4天换液1次。
    KYSE450细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    LLC-MK2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    Hepa 1-6细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代
    BCG牛乳培养基,英文名:Bromcresol Green Skim Milk Medium,用途:用于乳酸菌培养
    MMN琼脂,英文名:Modified Melin-Norkrans Agar,用途:用于蜜环菌等外生菌根真菌的培养
    L1210细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞样;细胞传代方法:1:2传代
    细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分
    肠道菌增菌液体培养基(肠道菌增菌肉汤/EE肉汤),英文名:Enterobacteria Enrichment Broth Mossel,用途:用于肠道菌的增菌培养
    SHEP1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    CCRFS-180细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    人假尿苷酸合酶1(PUS1)ELISA试剂盒,英文名:Human PUS1 ELISA Kit,规格:48T/96T
    人氧固醇结合蛋白样蛋白1A(OSBPL1A)ELISA试剂盒,英文名:Human OSBPL1A ELISA Kit,规格:48T/96T
    SW626细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    NCI-H1650[H-1650,H1650]细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
    YPD肉汤,英文名:YPD Broth,用途:用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
    胰蛋白月示肉汤,英文名:Tryptose Broth,用途:用于布氏杆菌和其它苛养菌培养
    葡萄糖蛋白胨肉汤,英文名:Dextrose Peptone Broth,用途:用于霉菌、酵母菌检测
    人Osterix蛋白(OSX)ELISA试剂盒,英文名:Human OSX ELISA Kit,规格:48T/96T
    小鼠单胺氧化酶A(MAOA)ELISA试剂盒,英文名:Mouse MAOA ELISA Kit,规格:48T/96T
    细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
    小鼠CCAAT增强子结合蛋白γ(CEBPγ)ELISA试剂盒,英文名:Mouse CEBPγ ELISA Kit,规格:48T/96T
    阿须贝氏葡萄糖培养基,英文名:Ashby’S Glucose Medium,用途:用于固氮菌的培养
    化钠营养琼脂,英文名:NaCl Nutrient Agar,用途:用于副溶血性弧菌的纯化
    贴壁细胞的消化方法介绍:1、胰酶。这是用得Z多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大,从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞,在37度条件下,一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含、镁的平衡液,否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少,一般是用原代培养时,从组织消化下细胞。这种方法作用温和,对细胞损伤较小,但是,价格也较贵。中止同样是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质,对细胞间也有一定作用。注意,它能显著影响pH值,而且在弱碱性条件下才易溶。因此,配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此,消化下来的细胞要洗一遍。4、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤比较大,但是分离成单细胞悬液的能力确实比较强。5、物理法。直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。6、冷冻法。此方法仅能用于细胞传代时。无法使组织上的细胞脱落下来。本方法的原理,我想是因细胞冷冻后收缩,从而从培养瓶上脱落下来。优点是:对细胞损伤小,不需要中止或洗细胞,方便,不需要另外配制消化液。特别适用那些贴壁不是特别紧,又特别娇气的细胞。不足是细胞常成小片脱落。此种方法曾用于因用其它方法传代导致大量细胞死亡操作的间充质干细胞、DC细胞的培养,效果非常满意。具体过程是:1、用较多的4度的PBS 洗涤一遍细胞(以6孔板为例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,静置操作台上,很快细胞就小片脱落,3、轻轻吹打,细胞即完全脱落,4、按一定比例传代。
    KM2猪肺炎支原体琼脂培养基,英文名:KM2 Mycoplasma Hyopneumoniae Agar Medium,用途:需添加马血清、青霉素
    细胞背景资料:详见相关文献介绍
    酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(亮酸/色酸缺陷),英文名:Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium,用途:用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
    hRMECs细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    B16细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:梭形;细胞传代方法:1:3传代,2-3天换液一次
    Capan-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:1:2-1:4传代,2-3天换液1次。
    HUVEC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
    改良桑塔基氏培养基基础(含2.5%NaCl),英文名:Starkey,s Medium Base, Modified with 2.5% NaCl,用途:用于脱肠菌属和脱弧菌的培养,每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
    UM液体培养基,英文名:Uchimiya and Miurashige Fluid Medium,用途:用于诱导愈伤组织形成
    甘露醇化钠琼脂琼脂培养基,英文名:Mannitol Salt Agar,用途:ZG药典2015,用于金黄色葡萄球菌选择性分离
    WK256细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    MCF-7细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代,3-4天长满
    JF-305细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代
    脑-心浸萃琼脂培养基,英文名:Brain-Heart Extraction Agar Medium,用途:用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
    沙氏葡萄糖液体培养基/沙氏葡萄糖肉汤(SDB),英文名:Sabouraud Dextrose Broth,用途:用于霉菌、酵母菌的培养
    葡萄糖醋酸盐培养基,英文名:Dextrose Acetate medium,用途:用于真菌培养
    细胞形态特性:详见细胞说明书
    为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。
    大鼠酸性酶1(ACP1)ELISA试剂盒,英文名:ACP1 ELISA Kit,规格:48T/96T
    石蕊牛乳培养基,英文名:Litmus Milk Medium,用途:用于测定细菌对牛乳的发酵
    营养盐培养液,英文名:Nutrient Salt Broth,用途:用于KJ性能试验,每升培养基中添加0.5g吐温-80
    小鼠海藻糖酶(TREH)ELISA试剂盒,英文名:Mouse TREH ELISA Kit,规格:48T/96T
    大鼠肾上腺髓质素前体(Pro-ADM)ELISA试剂盒,英文名:Pro-ADM ELISA Kit,规格:48T/96T
    人核因子κBYZ物激酶β(IKKβ)ELISA试剂盒,英文名:Human IKKβ ELISA Kit,规格:48T/96T
    造成实验室细胞污染常见情况总结:细胞培养中Z常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染,大多数较难处理。那么,哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢?我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】1)为节省时间,有人已经用超净台四个多小时,不开紫外灭菌30min,酒精擦拭后直接开始试验;2)器材或者溶液很久没用,未检测是否污染而直接使用;离心管多次使用,枪头为了方便交叉使用;3)超净台不点酒精灯;点了酒精灯放在右上角,而你在左下角做试验;4)不带手套,徒手操作;5)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋,未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具,如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需121°C高压灭菌20分钟后37%烤干备用)。超净台和桌面,东西太多太乱:超净台不是储物箱,什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台!这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面,切忌东西堆积如山,不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞!一不小心“飘”进你的细胞培养板里,细胞就会养的不好,啥时候死了都不知道!【培养箱太久没清洁】细胞污染了,并非直接扔了培养皿就不管了,首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染,如果有而且好几个板子都有类似的污染块,那很可能是培养箱中的水或者空气污染了,得给培养箱做个大扫除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水没了要记得加,还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂,难管理】在传代细胞这种卫生要求高,人多了,不确定因素多了,难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室,实验服当风衣穿,不扣纽扣,不戴,就容易造成细胞污染;超净台做实验时,喜欢说话聊着做试验,要是还不带口罩,里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢!
    10%化钠胰蛋白胨大豆肉汤,英文名:10% Sodium Chloride Tryptone Soy Broth,用途:用于金黄色葡萄球菌的增菌
    CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
    WI-38[WI38]细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    FL83B细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
    Hs 934.T细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:成纤维细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代,
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