HCC-1171人肺癌腺癌细胞系 专业技术指导 专注复苏

HCC-1171人肺癌腺癌细胞系 专业技术指导 专注复苏
NSC-34细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HSC-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 1353细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2传代。3天内可长满。
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净ZDT里备用，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW264.7，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
OCI-AML3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HSAS2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
SUP-M2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
去氧胆酸盐琼脂，英文名：Desoxycholate Agar，用途：用于肠道致病菌及大肠杆菌的选择性分离和计数
黄豆粉琼脂培养基，英文名：Bean Agar Medium，用途：用于放线杆菌的筛选和培养
葡萄球菌培养基110，英文名：Staphylococcus Medium 110，用途：用于通过明胶、甘露醇发酵试验对葡萄球菌的分离
pH7.0 化钠-蛋白胨缓冲液，英文名：Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0，用途：用于样品制备
细胞形态特性：详见细胞说明书
乳酸杆菌选择性肉汤(LBS肉汤)，英文名：Lactobacillus Selective Broth，用途：用于乳酸菌的选择性培养,每升需添加1.32ml冰乙酸
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Try，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
HPDLF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OE-19细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
Hepa1-6[Hepa1-6]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠组酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒，英文名：Mouse HRG ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠基质金属蛋白酶组织YZ因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-1 ELISA Kit，规格：48T/96T
碳琼脂，英文名：Charcoal Agar，用途：用于苛氧菌尤其是百日咳博鲍特氏菌培养
细胞背景资料：详见相关文献介绍
Z近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，1XPBS漂洗两次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿为例），37度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代Z重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
番茄汁肉汤，英文名：Tomato Juice Broth，用途：用于酵母菌和乳酸菌等耐酸菌的培养
营养琼脂(NA)，英文名：Nutrient Agar，用途：用于细菌的纯化和培养
淋病奈瑟菌增菌培养基基础，英文名：N.gonorrhoeae Enrichment Medium Base，用途：用于淋病奈瑟菌的增菌和转送,每100ml添加1支淋病奈瑟菌培养基添加剂和10ml无菌脱纤维绵羊全血
叠氮钠血琼脂基础，英文名：Azide Blood Agar Base，用途：用于链球菌和葡萄球菌分离和溶血试验,需添加5%绵羊血
BC-021细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Panc04.03细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
P3X63-Ag8.653细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MA-c细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
H.A.细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠抗红细胞抗体(ARCA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ARCA ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒，英文名：Mouse C4a ELISA Kit，规格：48T/96T
人85kDa核孔蛋白(NUP85)ELISA试剂盒，英文名：Human NUP85 ELISA Kit，规格：48T/96T
三糖铁琼脂培养基，英文名：Triple Sugar-Iron-Agar Medium，用途：用于肠杆菌科细菌生化试验
M17琼脂(进口原料)，英文名：M17 Agar，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测及分离被噬菌体感染的乳酸菌，每100ml添加1支10%乳糖溶液
厌氧菌肉汤MIC，英文名：Anaerobe Broth MIC，用途：用于肉汤微量稀释法测定厌氧菌敏感性养和厌氧菌培养
COV362细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
A-204[A204]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H660细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：2-3天换液1次。
小鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MMP-10 ELISA Kit，规格：48T/96T
人组织因子(TF)ELISA试剂盒，英文名：Human TF ELISA Kit，规格：48T/96T
人二嘧啶脱酶(DPYD)ELISA试剂盒，英文名：Human DPYD ELISA Kit，规格：48T/96T
人肌球蛋白ⅩⅧB(MYO18B)ELISA试剂盒，英文名：Human MYO18B ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒，英文名：AQP-4 ELISA Kit，规格：48T/96T
煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)，英文名：Brilliant Green Lactose Bile Broth，用途：用于大肠杆菌和大肠菌群的测定
胆汁七叶苷琼脂(BEA)，英文名：Bile Esculin Agar，用途：用于肠球菌确证和培养
MS培养基(1/2蔗糖、不含琼脂)，英文名：Murashige & Skoog Medium without Agar (1/2 Sucrose，用途：不含琼脂，蔗糖15g/L，用于植物组织培养
CHO培养基基础，英文名：CHO Medium Base，用途：加入不同碳源用于厌氧菌的鉴别试验
乳糖肉汤培养基，英文名：Lactose Broth，用途：含麝香草蓝,用于大肠菌群的测定
U2932细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hela299细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
RFL-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1437细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2-1：6传代,每周换液2次。
mEI琼脂，英文名：mEI Agar，用途：用于肠球菌快速测定
293[HEK-293]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Karpas-299细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
GLC-82细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞在室温下静置1-2天(注意不要放冰箱)，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心(1200rpm，5min)后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心(1000rpm，3min)收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。
HELF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代