NCI-H727[H727]人肺支气管良性肿瘤细胞系 实验平台专业技术指导

NCI-H727[H727]人肺支气管良性肿瘤细胞系 实验平台专业技术指导
小鼠转录激活因子1(ATF1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ATF1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人信号素4C(SEMA4C)ELISA试剂盒，英文名：Human SEMA4C ELISA Kit，规格：48T/96T
如何把细胞养的形态更好更漂亮。1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）；其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。3.关于培养瓶内加入培养基的量的问题。这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。（可能也是竞争很大，有优胜劣汰吧。呵呵。）对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。4.关于选择培养瓶的问题。个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比内好。这可能是因为比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。
化钠胰蛋白胨稀释液，英文名：Sodium Chloride Tryptone Diluent，用途：用于样品的制备与稀释
黄原胶液体发酵培养基(葡萄糖)，英文名：Xanthan gum Fluid Medium with Dextrose，用途：以葡萄糖为碳源,用于黄原胶生产
细菌保存培养基(半固体)，英文名：Bacteria Save Medium,Semisolid，用途：用于菌种培养与保存
Letheen琼脂基础，英文名：Letheen Agar Base，用途：用于卫生微生物检测,需添加7g/L吐温80
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
GVPC琼脂基础，英文名：Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base，用途：用于军团菌选择性分离
人钠/葡萄糖协同转运蛋白3(SGLT3)ELISA试剂盒，英文名：Human SGLT3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人弹性蛋白酶4(ELA4)ELISA试剂盒，英文名：Human ELA4 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠锚蛋白B(Ank-B)ELISA试剂盒，英文名：Ank-B ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞接收操作说明：请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。本公司细胞发货有四种形式：T25培养瓶(一般是贴壁细胞使用，悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多，当然，有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞，但是，长期经验来说，贴壁细胞容易发生形态变化，估计是细胞培养空间狭小，血清不足导致(Z主要是怕运输延误导致这些情况发生)，个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用，主要是冬天天气冷，温度低于4℃的地方，都要考虑冻存细胞)。T25培养瓶：是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。离心管：是用15ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶，可以暂时T75培养瓶，加入10-15ml培养基，建议10ml培养基，也可以使用T175培养瓶，加入50-60ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，Z好不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心(1000rpm，3min)收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。干冰：是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
GN增菌液(革兰氏阴性细菌增菌肉汤)，英文名：Gram Negative Enrichment Broth，用途：用于革兰氏阴性细菌尤其是志贺氏菌的增菌
酵母菌形态琼脂，英文名：Yeast Morphology Agar，用途：用于酵母菌的形态学分类
碎肉肉汤基础，英文名：Chopped Meat Broths（CM），用途：用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的培养,含VK ,需添加庖肉牛肉粒
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
碎肉葡萄糖肉汤基础，英文名：Chopped Meat Glucose（CMG），用途：用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的培养,含VK ,需添加庖肉牛肉粒
人肾肿瘤抗原(RAGE)ELISA试剂盒，英文名：Human RAGE ELISA Kit，规格：48T/96T
人前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA试剂盒，英文名：Human PGDS ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠生长抑素受体1(SSTR1)ELISA试剂盒，英文名：SSTR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠血清淀粉样蛋白A3(SAA3)ELISA试剂盒，英文名：SAA3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWFcp)ELISA试剂盒，英文名：Human vWFcp ELISA Kit，规格：48T/96T
人核仁蛋白2(NPM2)ELISA试剂盒，英文名：Human NPM2 ELISA Kit，规格：48T/96T
HCC1599细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：每3-4天换液
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
OVMANA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：5 x 10^4 cells/ml
NCI-H1355细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：每周换液2次。
NCI-H1954细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HFLS-OA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2342[H2342]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PLA-802细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
U373细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
NCI-H196细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：4-1：6传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
平板计数琼脂(PCA)，英文名：Plate Count Agar/ Standard Methods Agar，用途：用于细菌总数测定
肉肝琼脂，英文名：Meat Liver Agar，用途：用于厌氧菌的培养
V-KM培养基，英文名：V-KM Medium，用途：用于原生质体的培养，每100ml需添加2ml椰子乳
U373细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
SK-RC-52细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RASMCs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
OVCAR8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HL-60 Clone 15细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：维持细胞浓度在1×105-1×106/ml,每2-3天换液1次。
MV-1-Lu细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OS-RC-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
MCF7 [MCF-7]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MUS-M1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MUM-2B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
ARH-77细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样　；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
哥伦比亚肉汤，英文名：Columbia Broth，用途：用于细菌的培养
细胞形态特性：详见细胞说明书
改良Y培养基，英文名：Modified Y Medium，用途：用于小肠结肠炎耶尔森氏菌分离
OGY琼脂基础，英文名：Oxytetracycline Glucose Yeast Agar，用途：用于霉菌、酵母菌计数,葡萄糖10g/L,每100ml添加1支土霉素溶液
m-Endo肉汤，英文名：m-Endo Broth，用途：用于水中大肠菌群膜过滤法检测
人细胞角蛋白17(CK17/KRT17)ELISA试剂盒，英文名：Human CK17/KRT17 ELISA Kit，规格：48T/96T
人胰多肽(ProlAPP)ELISA试剂盒，英文名：Human ProlAPP ELISA Kit，规格：48T/96T
H-4-11-E细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RM-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Z近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，1XPBS漂洗两次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿为例），37度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代Z重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
假单胞菌琼脂培养基F基础，英文名：Pseudomonas Agar for Detection of fluorescin，用途：用于假单胞菌荧光素测定,每100ml添加1ml甘油(甘油)
N6培养基，英文名：N6 Medium，用途：适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
TBB培养基，英文名：Tyrobutyricun Broth Base，用途：用于乳酪产品中梭菌的计数
人免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒，英文名：Human IgG ELISA Kit，规格：48T/96T
人Ⅳ型胶原α3(COL4α3)ELISA试剂盒，英文名：Human COL4α3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠β2糖蛋白1抗体IgG(β2-GP1 Ab lgG)ELISA试剂盒，英文名：Mouse β2-GP1 Ab lgG ELISA Kit，规格：48T/96T
EAG3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EAG3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCTC1469[NCTC1469]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
RC92A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
肠道菌增菌液体培养基(肠道菌增菌肉汤/EE肉汤)，英文名：Enterobacteria Enrichment Broth Mossel，用途：用于肠道菌的增菌培养
NCI-H1299细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；多角形；细胞传代方法：1：2传代；3天传代一次。
RN-c细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LIXC-002细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：3传代,3-4天传1次
PC-9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。