人结肠MatchPair™: 结肠上皮和肿瘤组织提取物【Colon MatchPair™: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】

人结肠MatchPair™: 结肠上皮和肿瘤组织提取物【Colon MatchPair™: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】
产品信息：
产品说明
人结肠MatchPair™: 结肠上皮和肿瘤组织提取物【Colon MatchPair™: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】
       结肠在右髂窝内续于盲肠，连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部，大部分固定于腹后壁，将小肠包围在内。结肠壁从外依次为粘膜下层，肌层及外膜。公司科技提供来自新鲜或冷冻人体结肠上皮和肿瘤组织中高质量的总RNA，PCR准备的条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
      总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
         cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
         蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人癌组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
         潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
试剂及耗材  
人结肠MatchPair™: 结肠上皮和肿瘤组织提取物【Colon MatchPair™: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】Transwell板：
孔径<3.0µm                           细胞共培养                   研究下室细胞B代谢物（分泌物）对上室细胞A的影响
孔径=5.0、8.0、12.0µm           细胞趋化                      计数进入下室的细胞量，研究下室营养成分或趋化因子对上室细胞的影响
孔径=8.0、12.0µm                  细胞迁移                      计数进入下室的细胞量，研究上室细胞的迁移能力
孔径=8.0、12.0µm                  细胞侵袭                      计数进入下室的细胞量，研究上室细胞的侵袭能力
主要步骤
基质胶铺板、接种细胞
培养细胞、需要加药物的按相应浓度加入
细胞计数、结果统计
实验步骤：
1、人结肠MatchPair™: 结肠上皮和肿瘤组织提取物【Colon MatchPair™: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。  
2、在空中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4、用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。  
5、放入37度5% CO2培养箱中培养。按0，6，12，24小时取出，拍照 (具体时间依实验需要而定)。
6、统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。
7、数据处理：每个时间点的距离长度-0h距离=每个时间长度细胞整体迁移的距离，求出均数和标准差，时间为横轴，迁移距离为纵轴（mm）作图，并比较初始0h与实验结束时试验组与对照组的照片。
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