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人体乳腺癌组织源组织提取物【Cancer: Human Thyroid Cancer Derivatives】

产品信息
  • 产品说明
    人体乳腺癌组织源组织提取物【Cancer: Human Thyroid Cancer Derivatives】
          乳腺癌是发生于乳房腺上皮组织的一种Z常见的恶性肿瘤,主要分为非浸润性癌(原位癌)、早期浸润癌、浸润性癌三种类型。公司科技提供来自新鲜或冷冻人体乳腺癌组织中高质量的总RNA,PCR准备的条cDNA链,蛋白质及其亚组分。这些临床定义的人体组织标本采集自各地方医院,采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
          RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

             cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
            蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人癌组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
            潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。
    人体乳腺癌组织源组织提取物【Cancer: Human Thyroid Cancer Derivatives】
    产品信息:
    主要步骤
    基质胶铺板、接种细胞
    培养细胞、需要加药物的按相应浓度加入
    细胞计数、结果统计
    实验步骤:
    1、人体乳腺癌组织源组织提取物【Cancer: Human Thyroid Cancer Derivatives】先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。  
    2、在空中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
    3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
    4、用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。  
    5、放入37度5% CO2培养箱中培养。按0,6,12,24小时取出,拍照 (具体时间依实验需要而定)。
    6、统计方法:使用Image J软件打开图片后,随机划取6至8条水平线,计算细胞间距离的均值。
    7、数据处理:每个时间点的距离长度-0h距离=每个时间长度细胞整体迁移的距离,求出均数和标准差,时间为横轴,迁移距离为纵轴(mm)作图,并比较初始0h与实验结束时试验组与对照组的照片。
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    试剂及耗材  
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    孔径<3.0µm                           细胞共培养                   研究下室细胞B代谢物(分泌物)对上室细胞A的影响
    孔径=5.0、8.0、12.0µm           细胞趋化                      计数进入下室的细胞量,研究下室营养成分或趋化因子对上室细胞的影响
    孔径=8.0、12.0µm                  细胞迁移                      计数进入下室的细胞量,研究上室细胞的迁移能力
    孔径=8.0、12.0µm                  细胞侵袭                      计数进入下室的细胞量,研究上室细胞的侵袭能力


     
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