乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Breast MatchPair?: Normal Mammary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】品Pai

乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Breast MatchPair?: Normal Mammary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】品Pai细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Breast MatchPair?: Normal Mammary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】品Pai细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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(甘油)
500gGlycineAmresco分装
(甘氨酸)
1g/5g/25g原装GlycogenTypeIISigma G8751
(糖原II)
100mg/500mg/1g原装GlycogenTypeIIISigma G8876
(糖原III)
100mg/500mg/1g原装GlycogenTypeIXSigma G0885
(糖原IX)
乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Breast MatchPair?: Normal Mammary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】品PaiCFD Others Mouse 小鼠 CFD / Adipsin 人细胞裂解液 (阳性对照)
人主动脉平滑肌细胞总RNAHASMC NA
NCI-H460 人肺癌细胞
CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水癌细胞)5×106cells/瓶×2
mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞
人肺转化细胞;AE1201 人肝窦内皮细胞完全培养基 100mL

乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Breast MatchPair?: Normal Mammary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】品Pai
人乳腺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人乳腺上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人乳腺上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人乳腺组织和肿瘤组织中制备。正常人乳腺组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人椎间盘髓核组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。