小鼠肾上皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Kidney Derivatives】

小鼠肾上皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Kidney Derivatives】
产品信息：
产品说明
小鼠肾上皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Kidney Derivatives】
       小鼠肾上皮细胞提取物是从小鼠原代肾上皮细胞提取的，小鼠原代肾上皮细胞从正常小鼠肾组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
      总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
         cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
         蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人癌组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
         潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
试剂及耗材  
小鼠肾上皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Kidney Derivatives】Transwell板：
孔径<3.0µm                           细胞共培养                   研究下室细胞B代谢物（分泌物）对上室细胞A的影响
孔径=5.0、8.0、12.0µm           细胞趋化                      计数进入下室的细胞量，研究下室营养成分或趋化因子对上室细胞的影响
孔径=8.0、12.0µm                  细胞迁移                      计数进入下室的细胞量，研究上室细胞的迁移能力
孔径=8.0、12.0µm                  细胞侵袭                      计数进入下室的细胞量，研究上室细胞的侵袭能力
主要步骤
基质胶铺板、接种细胞
培养细胞、需要加药物的按相应浓度加入
细胞计数、结果统计
实验步骤：
1、小鼠肾上皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Kidney Derivatives】先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。  
2、在空中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4、用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。  
5、放入37度5% CO2培养箱中培养。按0，6，12，24小时取出，拍照 (具体时间依实验需要而定)。
6、统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。
7、数据处理：每个时间点的距离长度-0h距离=每个时间长度细胞整体迁移的距离，求出均数和标准差，时间为横轴，迁移距离为纵轴（mm）作图，并比较初始0h与实验结束时试验组与对照组的照片。
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交联琼脂糖凝胶 4B　100mL　Sepharose CL-4B　4-8℃
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