PA319人大肠癌细胞系 复苏团队专注复苏

PA319人大肠癌细胞系 复苏团队专注复苏
Hut-78细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CMT-167细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：5传代
ZR75-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠整合素β3(ITGβ3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ITGβ3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人前列腺素E受体3(EP3)ELISA试剂盒，英文名：Human EP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
HCEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC-9724细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RS4;11细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：成淋巴细胞；细胞传代方法：每周2-3次
很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的篇ZT，并不是因为细胞消化Z重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，总结下来，细胞培养中消化很重要，但其实消化并不是细胞培养的关键所在(虽然很重要)，关键所在是细胞来源，血清质量和水源(自己配制溶液的话)。我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题，很多时候bottleneck没有找到，虽然通过其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因为人们往往注意自己的操作，总觉得自己没有经验，而忽视试剂，溶液尤其是细胞的质量，后者其实才是许多细胞培养实验室常见的问题。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
改良巴尔斯氏培养基基础，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers, Modified，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
GAM肉汤，英文名：Glfu Anaerobic Medium Broth，用途：用于厌氧菌的培养
EEM培养基，英文名：Enterobacteriaceae Enrichment Mannitol Medium，用途：用于肠道致病菌的增菌
人晶状体蛋白μ(CRYμ)ELISA试剂盒，英文名：Human CRYμ ELISA Kit，规格：48T/96T
HuTu 80细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2—1：5传代，每周换液2-3次
SKNO-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A-549细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人补体成分4a(C4a)ELISA试剂盒，英文名：Human C4a ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：详见相关文献介绍
人GTP酶(KRAS)ELISA试剂盒，英文名：Human KRAS ELISA Kit，规格：48T/96T
黄原胶液体发酵培养基(淀粉)，英文名：Xanthan gum Fluid Medium with Starch，用途：以淀粉为碳源,用于黄原胶生产
马铃薯葡萄糖琼脂，英文名：Potato Dextrose Agar，用途：药典/欧洲药典，用于霉菌和酵母菌计数
Wilkins-Chalgren厌氧菌琼脂，英文名：Wilkins-Chalgren Anaerobe Agar，用途：用于厌氧菌的培养和药敏试验
人Kindlin人1蛋白(KIND1)ELISA试剂盒，英文名：Human KIND1 ELISA Kit，规格：48T/96T
MCMEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
AAV-293细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-2细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到70%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用1640培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，Z近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。
化十六烷三甲铵琼脂培养基基础，英文名：Cetrimide Agar Base，用途：用于铜绿假单胞菌选择性分离,每100ml添加1ml甘油(甘油)
番茄汁琼脂，英文名：Tomato Juice Agar，用途：用于乳酸菌的培养和计数
Lowenstein-Jensen培养基基础，英文名：Lowenstein-Jensen Medium Base，用途：含天冬酰胺,用于分枝杆菌的分离和鉴定,需添加甘油及鸡蛋
无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪大豆胨液体培养基)，英文名：Sterile Fluid Soybean-Casein Digest Broth，用途：用于药厂模拟灌装
人细胞色素P450家族成员24A1(CYP24A1)ELISA试剂盒，英文名：Human CYP24A1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
人神经上皮细胞转化基因1(NET1)ELISA试剂盒，英文名：Human NET1 ELISA Kit，规格：48T/96T
RPMI 1788细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2228细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HepG2/C3A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3—1：6传代，每周换液2次
hs 68细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
水琼脂培养基，英文名：Water Agar Medium，用途：用于饲料细菌总数测定中覆盖用
卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础，英文名：Lecithin Tween 80 Nutrient Agar Medium，用途：用于菌落总数测定,每升培养基需添加1支吐温80
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
沙氏脑心浸液琼脂基础，英文名：Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base，用途：用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBDA)，英文名：Violet Red Bile Dextrose Agar，用途：肠道菌计数琼脂,不含乳糖,用于肠道菌分离和计数
动力-盐培养基(A法)，英文名：Power-nitrate Medium，用途：用于细菌动力和盐还原试验
沙氏葡萄糖液体培养基，英文名：Sabouraud’s Glucose Broth Medium，用途：用于真菌培养
苛养厌氧菌肉汤，英文名：Fastidious Anaerobe Broth (FAB)，用途：用于厌氧菌的增菌培养,含0.075%琼脂
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
小鼠CD4分子(CD4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CD4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ssDNA ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒，英文名：CXCL16 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热；③超净台台面应整洁，用75%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用75%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入1ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO2的进入，将培养瓶放回CO2培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。
改良GAM琼脂基础，英文名：Glfu Anaerobic Medium Agar Base,Modified，用途：用于厌氧菌的培养,每100ml添加化血红素溶液、维生素K1溶液各1支
细胞形态特性：详见细胞说明书
亮绿胆盐琼脂，英文名：Brilliant Green Bile Agar，用途：用于大肠菌群的分离、鉴别和计数
标准Ⅰ号营养琼脂，英文名：StandaredⅠNutrient Agar，用途：用于细菌培养,营养丰富
NCI-H2195[H2195]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
T/G HAVSMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LNCaP clone FGC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
NCI-H1734细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：4-1：6传代。
L-929细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：8传代