T98人脑胶质细胞瘤细胞系 复苏团队专注复苏

T98人脑胶质细胞瘤细胞系 复苏团队专注复苏
CaSki细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCL-H548细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UWB1.289+BRCA1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
小鼠β干扰素(IFN-β)ELISA试剂盒，英文名：Mouse IFN-β ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠II型胶原α1(COL2α1)ELISA试剂盒，英文名：COL2α1 ELISA Kit，规格：48T/96T
ZR-75-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：6传代；每周换液2-3次。
253J-BV细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TALL-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：维持细胞密度在4×105-1×106 cells/ml之间，2-3天换液1次　
很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的篇ZT，并不是因为细胞消化Z重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，总结下来，细胞培养中消化很重要，但其实消化并不是细胞培养的关键所在(虽然很重要)，关键所在是细胞来源，血清质量和水源(自己配制溶液的话)。我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题，很多时候bottleneck没有找到，虽然通过其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因为人们往往注意自己的操作，总觉得自己没有经验，而忽视试剂，溶液尤其是细胞的质量，后者其实才是许多细胞培养实验室常见的问题。
细胞生长特性：贴壁
木本植物用培养基WPM(不含蔗糖和琼脂)，英文名：Wood Plant Medium without Sucrose and Agar，用途：用于植物组织培养
R2A琼脂，英文名：R2A Agar，用途：用于纯化水等制YY水中需氧菌总数测定
Amies运送培养基(含活性碳)，英文名：Amies Transport Medium with carbon，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存
人突触蛋白Ⅲ(SYN3)ELISA试剂盒，英文名：Human SYN3 ELISA Kit，规格：48T/96T
QGP1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CT26.WT[CT26WT]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RMD9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人免疫球蛋白G Fc段结合蛋白(FcγBP)ELISA试剂盒，英文名：Human FcγBP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：胶质瘤；男性
小鼠可溶性44s分子(sCD44s)ELISA试剂盒，英文名：Mouse sCD44s ELISA Kit，规格：48T/96T
蔗糖胰蛋白胨肉汤，英文名：Sucrose Tryptone Broth，用途：用于致病性嗜水气单胞菌的斑点酶联免疫试验
乙醇酸盐肉汤，英文名：Thioglycollate Broth（Enriched），用途：不含指示剂，用于厌氧菌、需氧菌和微需氧菌的培养，每100ml添加化血红素溶液、维生素K1溶液各1支
GC肉汤基础，英文名：GC Broth Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离培养,每100ml添加IsoVitaleX添加剂、V-C-NYJ剂（VCN）、无菌血红蛋白各1支
小鼠胸腺肽α1(Ta1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse Ta1 ELISA Kit，规格：48T/96T
A498细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
LTPA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞的冻存：目前，细胞冻存Z常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。主要操作步骤为：(1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天Z好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。(2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×10(6)～1×10(7)/mL之间。(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，Z好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
Vogel-Johnson琼脂基础，英文名：Vogel-Johnson Agar Base，用途：用于金黄色葡萄球菌选择性分离,每100ml添加1支1%亚碲酸钾溶液
精酸双水解酶试验培养基/精酸脱羧酶肉汤，英文名：Double-arginine Hydrolase Test Medium，用途：用于细菌的精酸双水解酶试验
木糖-明胶培养基，英文名：Xylose-Gelatin Medium，用途：用于明胶液化试验
MFC琼脂，英文名：MFC Agar，用途：用于大肠菌群的滤膜法检测
人尿皮质素2(UCN2)ELISA试剂盒，英文名：Human UCN2 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
人亲核素α6(KPNα6)ELISA试剂盒，英文名：Human KPNα6 ELISA Kit，规格：48T/96T
801-D细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KBM7细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
38C13细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A-498细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EB肉汤增菌液基础，英文名：EB Enrichment Broth，用途：用于李斯特氏菌的选择性增菌,每225ml添加2支啶酮酸溶液
高氏合成一号琼脂培养基，英文名：Gauze’s Synthetic Agar Medium，用途：用于放线菌的培养
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
YM琼脂(酵母霉菌琼脂)，英文名：Yeast Mold Agar，用途：用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培养
LB肉汤(Lennox)，英文名：LB Broth,Lennox，用途：用于分子生物学中大肠杆菌的培养
甘油甘酸琼脂基础，英文名：Glycerol glycine agar (Okazaki and Okami, 1976)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定，每100ml添加2支甘油
Eugon LT 100琼脂基础，英文名：Eugon LT 100 Agar Base，用途：用于中细菌总数的测定,每200ml添加1支吐温80
YPD琼脂，英文名：YPD Agar，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
大鼠血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-4)ELISA试剂盒，英文名：GP-4 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠连接蛋白37(CX37)ELISA试剂盒，英文名：CX37 ELISA Kit，规格：48T/96T
人塑化剂(DBP)ELISA试剂盒，英文名：Human DBP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养实验基本操作：①进无菌室前要彻底洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。②操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。③使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。④操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。⑤吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。⑥操作完毕后应整理好工作台面，用消毒水浸泡的纱布擦拭台面；防止细胞交叉污染：所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，可做细胞遗传学方面的鉴定，如发现原有的细胞遗传物发生改变，可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系的传代工作应由两人独立进行；无菌室的彻底消毒①新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比，的优点是便宜，而且可以稀释50倍用，而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。②甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉，熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。
LPM琼脂基础，英文名：LPM Agar Base，用途：用于李氏菌选择性分离,每100ml添加拉氧头孢溶液、β-乙醇各1支
细胞形态特性：详见细胞说明书
动力-盐培养基(A法)，英文名：Power-nitrate Medium，用途：用于细菌动力和盐还原试验
根瘤菌培养基YM，英文名：Nodule Bacteria Medium YM，用途：用于根瘤菌的培养
HRC99细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hs 688(A).T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代
Sall BclxL 50RFP细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：2传代
HEB细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
OE-33细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代