EvaGreen qPCR 染料 适于qPCR 和 HRM （没有之一）荧光染料

EvaGreen qPCR 染料  适于qPCR 和 HRM （没有之一）荧光染料

图 1. EvaGreen® dye binds to dsDNA via a “release-on-demand” mechanism.

图2. EvaGreen无毒，无致突变性，对水生生物无危害性。

EvaGreen 是一种用于实时定量 PCR （ qPCR ）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性， EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。
    首先， EvaGreen 对 PCR 的YZ性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 3）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的YZ性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。

图3. 比较Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 ABI (blue) 和 Qiagen (red)fast SYBR Green master mixes, 显示相比 SYBR Green，EvaGreen 有着超级灵明度。 （ A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.）		图 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红色）、杂合型（紫色）和野生型（蓝色）。（数据由 Corbett Research 提供）
		图 5 . EvaGreen 在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱