P31/FUJ人急性单核白血病细胞系 传代很慢要怎么操作
HFL细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
KM2猪肺炎支原体肉汤培养基,英文名:KM2 Mycoplasma Hyopneumoniae Broth Medium,用途:江苏二号,需添加马血清、青霉素
KM8P培养基(不含激素),英文名:Kao&Michayluk Medium without Hormones,用途:用于原生质体的培养
马铃薯葡萄糖半固体琼脂,英文名:Potato Dextrose Semisolid Agar,用途:用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检验
细胞株(系)的使用,为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的,长期连续传代的细胞,不仅消耗大量的人力和物力,而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化,因而细胞失去原有的遗传特性,有时还会由于细胞污染而造成传代中断,种子丢失。因此,在实际工作中常需冻存一定数量的细胞,以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。目前,细胞冻存Z常用的技术是液氮冷冻保存法,主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻,细胞内外的水分会很快形成冰晶,从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度ZG,pH值改变,部分蛋白质由于上述原因而变性,引起细胞内部空间结构紊乱,溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶,使细胞内结构成分造成破坏,线粒体肿胀,功能丢失,并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变,使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多,随冷冻温度的降低,冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤,而致细胞死亡。因此,细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分,减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质分子量小,溶解度大,易穿透细胞,可以使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性,且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外,减少胞内形成冰结晶的机会,从而减少冰晶对细胞的损伤。
细胞背景资料:详见相关文献介绍
阿姆斯壮镰刀菌培养基基础,英文名:Armstrong Fusarium Medium Base,用途:用于镰刀菌的培养,每100ml培养基中添加1支阿姆斯壮镰刀菌培养基添加剂
甘露醇化钠琼脂/甘露醇盐琼脂,英文名:Manitol Salt Agar,用途:用于金黄色葡萄球菌选择性分离
念珠菌BCG琼脂基础,英文名:Candida BCG Agar / Candida Bromcresol Green Agar,用途:用于念珠菌的选择性分离和培养,每200ml添加5支新霉素溶液
淀粉铵琼脂,英文名:Starch Ammonium Sulphate Agar(Krassilnikov, 1950),用途:用于链霉菌属的培养鉴定
NCTC clone 929细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
STC-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
MEF(CF-1)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
人抗肾上腺皮质抗体(AAA)ELISA试剂盒,英文名:Human AAA ELISA Kit,规格:48T/96T
人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒,英文名:Human AAA ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠D-二聚体(D2D)ELISA试剂盒,英文名:Mouse D2D ELISA Kit,规格:48T/96T
人磷脂酰肌醇特异性磷酯酶Cβ3(PLCβ3)ELISA试剂盒,英文名:Human PLCβ3 ELISA Kit,规格:48T/96T
BCYE-Cys琼脂基础,英文名:Buffered Charcoal Yeast Extract Agar without L-cys,用途:用于军团菌选择性分离,每100ml添加1支可溶性焦铁
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
碱性蛋白胨水,英文名:Alkaline Peptone Water,用途:用于致病性嗜水气单胞菌的培养
购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因比较复杂,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳;血清使用错误或血清的品质不佳;解冻过程错误;冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心;悬浑细胞误认为死细胞;培养温度使用错误;细胞置于-80℃太久等。建议严格参照ATCC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞,其离心速率一般为300×g(约1OOOrpm),5-10分钟,转速过高或离心时间过长都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心力决定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r为离心机转轴ZX与离心套管底部内壁的距离;rpm为离心机每分钟的转数;RCF(relative centrifugal force)为相对离心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍数来表示单位。
BT20细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HA1800细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HCC1419细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HRCEC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
RSC-364细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
SW1417[SW-1417]细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
【冻存细胞操作】1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染),在冻存前1d换液;2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×10(7)/ml左右密度,离心,去上清;3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,可使冰点降低,使细胞内水分在冻结前透出细胞外;4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m悬液;5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,做好标记;6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min时间内,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。【复苏细胞操作】1)从罐中取出冻存管;2)迅速放入36℃~37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成;3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液;4)低速离心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培养液洗一次;5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分,密度应达到10(7)/ml,在融后稀释20倍时,仍能保持5×10(5)/ml数量。
细胞传代方法:1:5传代
M07e细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
ZRLC-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
JB6-C30细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
AV 12细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞样;细胞传代方法:1:8-1:20传代;每周换液2-3次。
YPD琼脂,英文名:YPD Agar,用途:用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
mTEC琼脂,英文名:m TEC Agar,用途:用于大肠杆菌的膜过滤法检测
酵母浸粉葡萄糖琼脂,英文名:Yeast Extract Glucose Agar,用途:用于地衣芽孢杆菌、芽孢菌、密执安棍状杆菌、金黄杆菌、蜂房哈夫尼菌、荧光假单胞菌和粘质沙雷氏菌的培养
胰蛋白胨酵母浸粉肉汤,英文名:ISP Medium 1(Tryptone Yeast Extract Broth,用途:用于链霉菌属的培养鉴定
丙二酸钠培养基,英文名:Sodium malonate Medium,用途:用于细菌生化鉴定
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
HL-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
LIXC-011细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
DMS 53细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2-1:3传代,每周2-3次
pH7.4盐缓冲液(PBS),英文名:pH7.4 PBS Broth,用途:用于样品制备
营养半固体琼脂(NSA),英文名:Nutrient Semisolid Agar,用途:用于细菌鉴定试验 GB4789.31
SBG肉汤,英文名:Selenite Brilliant Green Broth,用途:用于沙门氏菌选择性增菌
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
改良Frey氏培养基基础,英文名:Modified Mycoplasma Broth Medium Base(Frey),用途:每 90ml 培养基中添加 1 支 改良Frey氏培养基基础添加剂 和 10ml 马血清
人组织蛋白酶K(CTSK)ELISA试剂盒,英文名:Human CTSK ELISA Kit,规格:48T/96T
人多胺调节因子1结合蛋白1(PMFBP1)ELISA试剂盒,英文名:Human PMFBP1 ELISA Kit,规格:48T/96T
HC琼脂基础,英文名:HC Agar Base,用途:用于中霉菌的计数,每升添加20ml吐温80
细胞生长特性:悬浮生长
细胞形态特性:淋巴母细胞
脑心浸出液琼脂(BHIA),英文名:Brain Heart Infusion Agar,用途:用于细菌尤其是苛养菌的培养
293T细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:4-8传代;26-36小时1次
Hs 343.T细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞;细胞传代方法:1:2—1:3传代;每周换液2-3次。
U937细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
人肌糖ζ(SGCζ)ELISA试剂盒,英文名:Human SGCζ ELISA Kit,规格:48T/96T
人免疫球蛋白A Fc段受体Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA试剂盒,英文名:Human FcαRⅠ/CD89 ELISA Kit,规格:48T/96T