PC-12(未分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系 消化操作需要注意什么
菌种培养基，英文名：Strain Medium，用途：用于菌种培养与保存(pH6.5)
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBDA)，英文名：Violet Red Bile Dextrose Agar，用途：肠道菌计数琼脂,不含乳糖,用于肠道菌分离和计数
碱性琼脂，英文名：Alkaline Agar，用途：用于霍乱弧菌的选择性分离
小鼠D-乳酸脱酶(D-LDH)ELISA试剂盒，英文名：Mouse D-LDH ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肌腱蛋白R(HnPNP/R)ELISA试剂盒，英文名：HnPNP/R ELISA Kit，规格：48T/96T
麦康凯琼脂培养基，英文名：MacConkey Agar Medium，用途：ZG药典2015，用于大肠埃希氏菌选择性分离
细胞背景资料：该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。NGF可诱导产生神经表型。这些细胞不合成。
肝浸液培养基/肝汤，英文名：Liver Infusion Broth，用途：用于嗜热芽孢菌的鉴别培养，需添加牛肝粒牛肝粒
小鼠毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ATM ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠自身免疫调节因子(AIRE)ELISA试剂盒，英文名：Mouse AIRE ELISA Kit，规格：48T/96T
Z近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，1XPBS漂洗两次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿为例），37度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代Z重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
细胞形态特性：多角形
抗生素培养基8号，英文名：Medium 8，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂)，英文名：Fluid Thioglycollate Medium，用途：用于无菌检查
沙堡液体培养基，英文名：Sabouraud’s Broth Medium，用途：用于真菌杀灭试验
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Trypt，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
碳琼脂，英文名：Charcoal Agar，用途：用于苛氧菌尤其是百日咳博鲍特氏菌培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
布氏肉汤，英文名：Brucella Broth，用途：用于布鲁氏菌培养以及弯曲菌分离和动力试验
BAr-T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2110细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代，每周换液2-3次
V79-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PG49细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PW(蛋白胨水)，英文名：Peptone Water，用途：用于样品制备
DTA培养基，英文名：DTA Medium，用途：用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢数的测定
小川氏培养基基础，英文名：Ogawa Medium Base，用途：用于结核杆菌的药敏试验、分离和培养,需添加甘油和全蛋液
细胞传代方法：1：2传代
RAW 264.7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H446细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁/悬浮生长，混合；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
FM88细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OMC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TE354T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
贴壁细胞的消化方法介绍：1、胰酶。这是用得Z多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此，配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此，消化下来的细胞要洗一遍。4、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤比较大，但是分离成单细胞悬液的能力确实比较强。5、物理法。直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。6、冷冻法。此方法仅能用于细胞传代时。无法使组织上的细胞脱落下来。本方法的原理，我想是因细胞冷冻后收缩，从而从培养瓶上脱落下来。优点是：对细胞损伤小，不需要中止或洗细胞，方便，不需要另外配制消化液。特别适用那些贴壁不是特别紧，又特别娇气的细胞。不足是细胞常成小片脱落。此种方法曾用于因用其它方法传代导致大量细胞死亡操作的间充质干细胞、DC细胞的培养，效果非常满意。具体过程是：1、用较多的4度的PBS 洗涤一遍细胞(以6孔板为例，加1.5ml/孔)，2、再加0.5毫升4度的PBS，静置操作台上，很快细胞就小片脱落，3、轻轻吹打，细胞即完全脱落，4、按一定比例传代。
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(尿嘧啶缺陷/ SC-Ura)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Uraci，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
霍乱双糖铁琼脂，英文名：Cholera Double Sugar Iron Agar，用途：用于霍乱弧菌生化试验
人Clavesin人2蛋白(CLVS2)ELISA试剂盒，英文名：Human CLVS2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人神经连接蛋白1(NLGN1)ELISA试剂盒，英文名：Human NLGN1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
PALCAM琼脂基础，英文名：PALCAM Agar，用途：用于李氏菌分离,每100ml添加多粘菌素B溶液、头孢他啶溶液各1支
HVT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
造成实验室细胞污染常见情况总结：细胞培养中Z常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】1)为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌30min,酒精擦拭后直接开始试验；2)器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用；3)超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验；4)不带手套，徒手操作；5)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需121°C高压灭菌20分钟后37％烤干备用)。超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不好，啥时候死了都不知道！【培养箱太久没清洁】细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且好几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂，难管理】在传代细胞这种卫生要求高，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！
NCI-H128细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H28细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：3-1：6传代，每周换液2-3次
HCT-116细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，3-4天换液一次
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
小牛浸液琼脂，英文名：Veal Infusion Agar，用途：用于苛养菌的培养
AC肉汤，英文名：AC Broth，用途：用于常见微生物的培养和不含防腐剂的样品的检测
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(组酸/亮酸/色酸/腺嘌呤缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细胞生长特性：疏松贴壁，有多细胞聚集体
MKN-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1563[H1563]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠巨噬细胞炎性蛋白相关蛋白1(MRP1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MRP1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TSI ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠脂联素受体2(ADIPOR2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ADIPOR2 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠成纤维细胞生长因子13(FGF13)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FGF13 ELISA Kit，规格：48T/96T
