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解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
小鼠FK506结合蛋白样蛋白(FKBPL)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FKBPL ELISA Kit，规格：48T/96T
IHH-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
J-111细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人集聚蛋白(AGRN)ELISA试剂盒，英文名：Human AGRN ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
NCI-H2081[H2081]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PA319细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Ca759细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TE-14细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
HumanTPC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
Thayer-Martin 选择性琼脂基础/改良Thayer-Martin选择性琼脂基础，英文名：（Modified）Thayer-Martin Selective Agar(MTM II Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离
无菌胰酪大豆胨琼脂培养基/大豆酪蛋白琼脂培养基，英文名：Sterile Soybean-Casein Digest Agar Medium，用途：用于药厂模拟灌装
可溶性淀粉琼脂，英文名：Soluble Starch Agar，用途：用于细菌淀粉水解试验
胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)，英文名：Soybean-Casein Digest Agar，用途：用于YJ剂效力检查（ZG药典2010）
细胞形态特性：成髓细胞
抗生素培养基36号，英文名：Medium36（Soybean-Casein Digest Agar Medium），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
YPD肉汤，英文名：YPD Broth，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
Littman琼脂基础，英文名：Littman Agar Base，用途：用于真菌的分离培养,每100ml添加0.3g链霉素
盐还原菌培养基F，英文名：Postgate’s Medium F for Sulfate Reducers，用途：含琼脂,用于脱微生物的培养和计数,每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
细胞的衰老:体外细胞培养实验证明：成纤维细胞：来自胎儿传代50次后衰老死亡，来自成人传代20次后衰老死亡(与具体年龄有关；来自小鼠传代14--28次后衰老死亡，来自乌龟传代90--125次后衰老死亡。细胞衰老过程中会发生一系列的变化，包括：蛋白质合成速度降低，已有蛋白质结构变化，特异蛋白质成份出现;同时，细胞核，线粒体，膜系统、骨架系统等都有结构、功能的改变。细胞衰老原因，尚无定论，出现过好几种理论与假说，其中得到较广泛认可的是“自由基损伤假说”。细胞凋亡:细胞的死亡是个体存活的正常现象，常见的细胞死亡形式有3种：坏死、凋亡和细胞毒性。多细胞生物的生命活动中，因为环境因素的突然变化或病原物的入侵，导致一部分细胞死去，称为细胞的病理死亡，或细胞坏死。坏死是细胞暴露于严重的物理或化学刺激时导致的细胞死亡；细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于其它两种细胞死亡机理，如杀伤T细胞的细胞毒性作用。还有一种情况，一部分细胞的死亡是生物个体正常生命活动(代谢、生长、发育、分化)的一个必要部分；似乎带有“牺牲局部，保全整体”的意味。这种情况下的细胞死亡，明显地受遗传控制，称为细胞凋亡。凋亡(Apoptosis)则是程序性的、正常的细胞死亡，是机体清除无用的或者不想要的细胞的手段。它与细胞坏死是两个截然不同的过程，无论从形态学、生物学还是生化的特征来说，都有明显的区别。细胞凋亡现象普遍存在于生物界。细胞凋亡与细胞增殖、分化和衰老起着互补与平衡的作用，在多细胞动物的发育、形态建成与维持中扮演至关重要的角色。作为细胞的一种基本生命现象，凋亡失控的结果将是可怕的：凋亡不足时，易发生癌变、病毒性疾病和自身免疫疾病;而凋亡过量则可能产生获得性免疫缺陷综合征(HIV)、重症肝炎与退行性神经疾病，如老年性痴呆症(Alzheimer"s disease)、帕金森氏症(Parkinson"s disease)。因此研究细胞凋亡及其机理具有重要的理论和实践意义。
人脱表雄酮酸酯(DHEA-S)ELISA试剂盒，英文名：Human DHEA-S ELISA Kit，规格：48T/96T
人凋亡相关因子(FAS)ELISA试剂盒，英文名：Human FAS ELISA Kit，规格：48T/96T
人α突触核蛋白(α-SYN)ELISA试剂盒，英文名：Human α-SYN ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
PK(15)[PK15,PK-15]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
T241细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SCC-090细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MS培养基，英文名：Murashige & Skoog Medium，用途：含琼脂，广泛用于植物器官、花药、细胞和原生质体的培养
MS大量元素，英文名：Murashige & Skoog Macronutrients，用途：用于植物组织培养
阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)，英文名：Enterobacter Cloacae Isolation Agar，用途：用于阴沟肠杆菌的分离
改良McBride琼脂基础(MMA)，英文名：McBride Agar Base,Modified，用途：用于李斯特氏菌的选择性分离
大鼠雄激素诱导蛋白1(AIG1)ELISA试剂盒，英文名：AIG1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人NADH脱酶6(ND6)ELISA试剂盒，英文名：Human ND6 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠胞外超氧化物歧化酶3(SOD3)ELISA试剂盒，英文名：SOD3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒，英文名：Human GM-CSF ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
EB-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2-1：4传代，每周2-3次。
SNU-620细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
AMC-HN-8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MUTZ-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代
HCEC-12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UM-UC-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
Jurkat,CloneE6-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
小鼠内皮素转化酶1(ECE1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ECE1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代方法：每周2-3次。
GES细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COLO829细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LNCaP clone FGC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
ACT-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 1088[SW-1088,SW1088]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2030[H2030]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MEF-11细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
M-肉汤，英文名：M-Broth，用途：用于干燥食品和种子中沙门氏菌的增菌和培养
M17琼脂，英文名：M17 Agar，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测及分离被噬菌体感染的乳酸菌，每100ml添加1支10%乳糖溶液
黄原胶液体发酵培养基(葡萄糖)，英文名：Xanthan gum Fluid Medium with Dextrose，用途：以葡萄糖为碳源,用于黄原胶生产
DG-18琼脂基础，英文名：Dichloran Glycerol Agar Base，用途：用于霉菌酵母菌和嗜渗酵母菌的计数,每升添加220g甘油
细胞生长特性：悬浮生长
KM12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
MRC-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样 ；细胞传代方法：1：2-1：5传代；每周1-2次。
RH30[RC13,RMS13,SJRH30]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
AMO-1细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A253细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
mpc-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长 ；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
双抗巧克力琼脂基础，英文名：Bi-Anti Chocolate Agar Base，用途：用于嗜血杆菌和奈瑟菌的培养,每100ml添加1支双抗巧克力琼脂添加剂和5%无菌脱纤维绵羊全血
PPLO 肉汤基础，英文名：PPLO Broth Base，用途：无红,用于支原体的培养
普通肉汤，英文名：Routine Broth，用途：含0.1%二钾,用于致病性嗜水气单胞菌的增菌
Todd-Hewitt琼脂，英文名：Todd-Hewitt Agar，用途：用于链球菌培养,选择性添加红霉素等抗生素用于链球菌分离
人谷丙转酶2(ALT2)ELISA试剂盒，英文名：Human ALT2 ELISA Kit，规格：48T/96T
