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解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
小鼠维生素D2(VD2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse VD2 ELISA Kit，规格：48T/96T
786-O[786-0]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MCF-7B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ⅠCTP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
A375细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
CHO/dhFr-细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
NCI-H211[H211]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hep G2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
IHC-ST1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
脱弧菌培养基基础，英文名：Desulfovibrio Medium Base（DSMZ Medium 63），用途：用于脱弧菌的培养，每100ml添加1支脱弧菌培养基添加剂
改良Camp-BAP琼脂基础，英文名：Camp-BAP Agar,Modified，用途：用于弯曲杆菌选择性分离,每100ml添加改良Camp-BAP琼脂基础添加剂A、改良Camp-BAP琼脂基础添加剂B各1支
Bolton肉汤基础，英文名：Bolton Broth Base，用途：用于弯曲菌选择性增菌,每100ml添加1支Bolton肉汤基础添加剂和5ml Bolton肉汤基础添加剂
麦芽汁琼脂培养基，英文名：Malt Agar Medium，用途：含3%麦芽浸粉,不含霉素,用于霉菌和酵母菌的分离和培养
细胞形态特性：多角形
Fraser肉汤增菌液基础，英文名：Fraser Enrichment Broth Base，用途：用于李斯特氏菌增菌
麦康凯(MAC)琼脂，英文名：MacConey Agar，用途：含结晶紫，3号胆盐,用于肠道菌的选择性分离
GC琼脂基础，英文名：GC Agar Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离
小牛浸液肉汤，英文名：Veal Infusion Broth，用途：用于苛养菌的培养
细胞传代的一般方法：开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1万单位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20ml）(以上用具需经121℃至少15分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、-20℃冰箱；操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH培养液100ml内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS洗液冲洗细胞表面1-2次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。
大鼠干扰素β(IFN-β)ELISA试剂盒，英文名：IFN-β ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse GIP ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠雌激素受体相关受体α(ERRα)ELISA试剂盒，英文名：ERRα ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：NGF受体阳性。
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
SW116细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SC细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CAMA-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞贴壁斑块；紧凑，很少汇合；细胞传代方法：1：3—1：4传代；每周换液2-3次。
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(组酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Histi，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
煌绿磺胺嘧啶琼脂(BGS琼脂)，英文名：Brilliant Green Agar with Sulfadiazine，用途：含磺胺嘧啶,用于沙门氏菌的选择性分离
胰蛋白胨大豆琼脂/胰化大豆蛋白琼脂(TSA)，英文名：Tryptic Soy Agar，用途：用于细菌的计数和培养
水琼脂培养基，英文名：Water Agar Medium，用途：用于饲料细菌总数测定中覆盖用
人睾丸受体2(TR2)ELISA试剂盒，英文名：Human TR2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人糖原合成酶激酶3α(GSK3a)ELISA试剂盒，英文名：Human GSK3a ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠血小板反应蛋白4(THBS4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse THBS4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人心型脂肪酸结合蛋白(FABP3)ELISA试剂盒，英文名：Human FABP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
BV173细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CMEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
AML12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
BGC-823细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
SW1990细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC1428细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长，偶尔上皮细胞液泡的形成；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：4-1：8传代；每周换液2-3次。
NCI-H1734细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：4-1：6传代。
小鼠补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse C3 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代方法：1：3传代；3-4天1次。
YH-13细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2传代
KM933细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EHEB细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC-Y45细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PtK1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW403[SW-403]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HTR-8/SVneo细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
木炭-头孢苄血琼脂基础(CCBA培养基基础)，英文名：Charcoal CefalexinBlood Agar Base，用途：用于百日咳博鲍特氏菌和副百日咳博德特氏杆菌的选择性分离。每100ml添加1支头孢苄溶液和10ml无菌脱纤维绵羊血
西蒙氏柠檬酸盐琼脂/枸橼酸盐琼脂，英文名：Simmons Citrate Agar，用途：用于柠檬酸盐利用实验
BDS培养基，英文名：Bacteroid Selective Agar，用途：用于拟杆菌的选择性分离
营养琼脂(pH6.0)，英文名：Nutrient Agar, pH6.0，用途：用于轻度酸性环境微生物的培养
细胞生长特性：贴壁生长
JVM-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HFLS-RA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
ChaGo-K-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：4-1：8传代；每周换液2次。
RAT2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COLO320DM细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁生长；细胞形态特性：圆形的并能折光的；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
HepG2[HepG2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
T1N0肉汤，英文名：T1N0 Broth，用途：用于霍乱弧菌的生长试验
毛藓菌琼脂7号，英文名：Trichophyton Agar #7，用途：用于毛藓菌属的鉴定
乳糖TTC琼脂基础，英文名：Lactose TTC Agar Base，用途：用于水中大肠菌群的滤膜法测定,每200ml添加1支0.5%TTC溶液
葡萄球菌增菌肉汤基础，英文名：Staphylococcus Enrichment Broth Base，用途：用于凝固酶阳性葡萄球菌选择性增菌,每100ml添加1支1%亚碲酸钾溶液
人卵泡抑素(FST)ELISA试剂盒，英文名：Human FST ELISA Kit，规格：48T/96T
