C-33 A人子宫颈癌细胞系 细胞ZX复苏传代
巴尔斯氏培养基基础,英文名:Baar,s Medium for Sulfate Reducers,用途:用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养,每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
联合固氮菌培养基,英文名:Endophytic Diazotrophs Medium,用途:用于固氮螺菌的培养
豆粉琼脂,英文名:Soya Flour Agar,用途:用于血琼脂制备,需添加无菌脱纤维绵羊全血
化钠蔗糖琼脂培养基,英文名:Sodium Chloride Sucrose Agar Medium,用途:用于霍乱弧菌的选择性分离
大鼠白细胞激活黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒,英文名:ALCAM ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠组蛋白乙酰基转移酶(HAT)ELISA试剂盒,英文名:Mouse HAT ELISA Kit,规格:48T/96T
Malme-3M细胞专业复苏;细胞生长特性:混合生长;细胞形态特性:成纤维细胞;细胞传代方法:1:2-1:4传代,2天换液1次。
LIXC-012细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
脑心浸出液琼脂(BHIA),英文名:Brain Heart Infusion Agar,用途:用于细菌尤其是苛养菌的培养
马铃薯葡萄糖琼脂,英文名:Potato Dextrose Agar,用途:美国药典/欧洲药典,用于霉菌和酵母菌计数
细胞背景资料:C-33A细胞株是N. Auersperg从宫颈癌切片中建立的一系列细胞株(参见ATCC CRL-1594和ATCC CRL-1595)中的一株。 细胞一开始就表现出亚二倍体核型及上皮细胞形态。 连续传代可以观察到核型不稳定。 存在成视网膜细胞瘤蛋白(pRB),但大小不正常。 P53表达上调,且有一个273位密码子的点突变导致Arg -> Cys的替换。 人乳头瘤病毒DNA及RNA阴性。
锰盐营养琼脂(锰营养琼脂培养基),英文名:Mn2+ Nutrient Agar,用途:用于芽孢杆菌的培养
高盐察氏培养基,英文名:Salt Czapek Dox Medium,用途:用于霉菌总数的测定
HCC1395细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代,每周换液2—3次
CHO-K1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代
293FT细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:圆形;细胞传代方法:1:2传代
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞培养方面注意的几点:无菌意识要强:实验进行前,超净台以紫外灯照射30分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在ZY无菌区域,一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基:不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用neurobase培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升高到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
HSC-2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
S180-V细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CHGF-003细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
以下对初次培养细胞人员来说,是非常好的开门教程:准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台;配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液);培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录);必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。无菌室的灭菌:定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%擦拭;CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%,再用紫外灯照射;实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟;实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台;实验人员的无菌准备:肥皂洗手、穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋、用75%酒精棉球擦净双手。
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝换课题,这个见得太多了,别不当会事。
FAO细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
RPE细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
IPEC-J2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
6T-CEM细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长 ;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
201T细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
C33A细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长 ;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
ReNcell CX细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Starky液体培养基,英文名:Starky Medium,用途:用于氧化杆菌的培养
精酸葡萄糖斜面琼脂(AGS),英文名:Arginine Glucose Slant Agar,用途:用于霍乱弧菌的复合生化试验
Nitsch&Nitsch培养基,英文名:Nitsch&Nitsch Medium,用途:Nitsch & Nitsch (1969) 含蔗糖不含琼脂
细胞生长特性:贴壁生长
碱性琼脂,英文名:Alkaline Agar,用途:用于霍乱弧菌的选择性分离
HCC1954 BL细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HUVEC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
Daoy细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:多边形;细胞传代方法:1:4-1:6传代;每周换液2-3次。
HFT-8810细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
YTMLC-90细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
Colo738细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CSQT-2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
AR42J细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
1%吐温80-玉米琼脂培养基基础,英文名:1% Tween80-Corn Meat Agar Medium Base,用途:用于白色念珠菌产芽管试验,每100ml添加1ml吐温80(吐温80)
大鼠载脂蛋白H(APOH)ELISA试剂盒,英文名:APOH ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞形态特性:上皮细胞样
人巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)ELISA试剂盒,英文名:Human MIP-1α ELISA Kit,规格:48T/96T
人胰高血糖素样肽2(GLP2)ELISA试剂盒,英文名:Human GLP2 ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒,英文名:Mouse NF-κB p65 ELISA Kit,规格:48T/96T
HEK293S细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
NCI-H2227细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
克氏双糖铁琼脂(KI),英文名:Kligler Iron Agar,用途:用于细菌的复合生化试验
淀粉铵盐培养基,英文名:Starch Ammonium Salt Medium,用途:用于放线菌的分离和计数
支原体肉汤培养基,英文名:Mycoplasma Broth Medium,用途:用于支原体的培养
生物素测定培养基,英文名:Biotin Assay Medium,用途:用于生物素的测定
大鼠葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒,英文名:GCK ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞传代方法:1:2传代
小鼠尿皮质素1(UCN1)ELISA试剂盒,英文名:Mouse UCN1 ELISA Kit,规格:48T/96T
人Toll样受体9(TLR9)ELISA试剂盒,英文名:Human TLR9 ELISA Kit,规格:48T/96T
HPDE6-C7(H6C7)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
PIG1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
厌氧肉肝汤培养基,英文名:Anaerobic Meat Liver Broth,用途:用于厌氧微生物的培养
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE),英文名:Trypticase Soy-Yeast Extract Broth,用途:用于单核增生李斯特氏菌的培养
缓冲蛋白胨水(BPW),英文名:Buffered Peptone Water,用途:用于沙门氏菌、阪崎杆菌的增菌(日本标准)
人谷氧还蛋白5(GLRX5)ELISA试剂盒,英文名:Human GLRX5 ELISA Kit,规格:48T/96T
人腺苷酸环化酶8(ADCY8)ELISA试剂盒,英文名:Human ADCY8 ELISA Kit,规格:48T/96T
人神经上皮细胞转化基因1(NET1)ELISA试剂盒,英文名:Human NET1 ELISA Kit,规格:48T/96T
CRL-2780细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
OVTOKO细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HMSC-he细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。