小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469

产品名称：小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469
产品规格：5×10^6cells/T25细胞培养瓶
生长条件：

培养条件	具体培养基条件请咨询我们
温度	37℃
空气条件	5% CO2，95% AIR
传代方法	1:2传代，2~3天换液
冻存条件	90%FBS+10%DMSO

   产品安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操 作，并请注意防护

小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469，使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469，细胞传代：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
（一）细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。
（二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：
1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，
3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，
4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，
5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的次传代比例为 1:2。
人癌氟尿嘧啶耐药上皮细胞PATU-8988/FU
人膀胱癌阿霉素耐药株上皮细胞BIU-87/Adr
人肺癌紫杉醇耐药株TaxolA549/
人低分化前胃癌氟尿嘧啶耐药株上皮细胞BGC-823/FU
人食管癌长春新碱耐药株上皮细胞Eca-109/VCR
人肺腺癌细胞培美曲塞耐药株上皮细胞H1975
人肺癌依托泊苷耐药株上皮细胞NCI-H446/VP
肋膜积腋(转移)慢性髓性白血病(原发)淋巴母细胞K-562
外周血早幼粒细胞急性早幼粒细胞白血病原粒细胞HL-60
肋膜积腋(转移)鳞细胞癌间皮瘤(肺原发)NCI-H226
肺腺癌非小细胞肺癌NCI-H522
结肠结肠腺癌细胞HT-29
肋膜积腋(转移)腺癌(乳腺原发)MDA-MB-231
乳腺导管癌细胞BT-549
肾癌细胞A-498
肾细胞腺癌细胞ACHN
皮肤恶性黑色素瘤细胞Malme-3M
皮肤(转移)恶性黑色素瘤(皮肤原发)细胞SK-MEL-2
皮肤恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-5
血管内皮细胞G2Hep
脐静脉细胞HUV-EC-C
原始粒细胞急性淋巴细胞白血病原始粒细胞 KG-1
ZG仓鼠卵巢细胞CHO-K1
小鼠胚胎纤维母细胞3T3-L1
人卵巢癌细胞3AO
人高转移鼻咽癌细胞系5-8F
人肾透明细胞癌细胞786-O 
人高转移肺癌细胞 95-D
人横纹肌肉瘤细胞A-204
人恶性黑色素瘤细胞A375-EGFP
人皮肤黑色素瘤细胞A375
人表皮癌细胞A431(A-431)
人肾癌细胞A498
 人肺癌细胞 A549
人横纹肌瘤细胞A673
人子宫内膜腺癌细胞AN3 CA
人转移腺癌细胞AsPC-1 
人乳腺导管癌细胞BT-474
人宫颈癌细胞C-33A
人肺癌细胞Calu-1
小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469，常见问题及解决方法：
1、观察细胞密度Z好用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；
2、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。
5、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
6、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，
7、如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 85-95%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁， 将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我 们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
8、细胞消化铺板，细胞死亡较多。 消化时间掌控好切勿消化过度，第二终止要完全（以T25瓶为例，加1ml胰酶用5ml完全培养基终止），第三控制吹打次数和力度，避免损伤。
我公司代理销售ATCC来源，sciencell来源，上海细胞库来源等细胞，另我公司有自建细胞库，生产培养各类细胞系，采用灌注法制备各种原代细胞。
欢迎新老客户咨询订购：小鼠肝上皮细胞NCTC clone 1469，常见问题及解决方法：
1、观察细胞密度Z好用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；
2、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。
5、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
6、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，
7、如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 85-95%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁， 将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我 们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
8、细胞消化铺板，细胞死亡较多。 消化时间掌控好切勿消化过度，第二终止要完全（以T25瓶为例，加1ml胰酶用5ml完全培养基终止），第三控制吹打次数和力度，避免损伤。
我公司代理销售ATCC来源，sciencell来源，上海细胞库来源等细胞，另我公司有自建细胞库，生产培养各类细胞系，采用灌注法制备各种原代细胞。
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