人子宫癌细胞C-33A

人子宫癌细胞C-33A购买须知：

细胞来源于美国进口传代，发出的细胞都是2-3代的细胞。收到后如有不懂，请直接联系我司技术给予您Z专业的指导。

对于人子宫癌细胞C-33A的培养即使对于专业的细胞学家来说，培养生物材料有时也会具有挑战性。本司拥有超过20年的细胞和微生物培养专业知识，已经获得并开发了大量实践，以帮助各级熟练的研究人员限度地提高其生物材料投资的回报。以下建议以便携，易于遵循的格式向用户提供了这些知识和见解。

培养检查：
（1）定期观察并仔细观察培养物的形态和活力。检查容器中的介质为微生物污染的宏观证据。这包括不寻常的pH变化（黄色或紫色）来自酚红的颜色、浊度或颗粒。此外，寻找漂浮在中空气界面。特别是检查船的边缘，因为它们不容易看见。通过显微镜。

（2）倒置显微镜在低功率下（40×），检查培养基是否有微生物污染的证据。细胞形态。细菌污染会出现小而闪闪发光的黑点。在细胞之间的空间内。酵母污染将表现为圆形或芽殖颗粒，而真菌则有细长丝状菌丝体。对于生长在烧瓶中的非粘附细胞，如杂交瘤，这是在显微镜上直接观察烧瓶的简单问题。在旋转瓶中生长的细胞生物反应器，细胞悬浮液的样本将需要被撤回并加载到显微镜载玻片中。或血球计进行观察。

（3）大多数贴壁细胞应牢固地附着在表面上。在某些情况下，健康细胞会聚集起来。在有丝分裂过程中有点脱落，显得非常折射。有丝分裂后，它们会重新附着。一些如果培养容器受到物理干扰，它们将自由漂浮。相比之下，死细胞经常聚集起来。从单层分离出来，显得比健康细胞更小和更暗（不折射）。

（4）悬浮培养细胞作为单细胞或细胞群生长。活细胞呈圆形而死细胞则显得更小、更暗。有时，细胞的一部分会附着在一起。生长在培养皿一侧，呈圆形或扁平状。附着细胞百分率随着培养条件和细胞密度的不同而不同。细胞碎片也可在健康细胞中观察到。种群。一些细胞系作为混合贴壁和悬浮培养物生长。

作为参考，一些ATCC细胞系的显微照片可在网站上找到。显示单元在两个不同的密度：刚刚继继培养（低）和刚刚在他们需要被传代（高）。

细胞计数：
细胞计数是必需的，以便建立或监测生长速率以及建立新的培养物。已知细胞数。血细胞仪（也被称为血细胞计数器）常用于估计。细胞数量和确定细胞活力。血球计是一种相当厚的玻片，有两个计数。室，每一边一个。每个计数室都有镜面，表面为3×3毫米的网格9。计数平方。（见图2）腔室凸出的侧面将盖住0.1毫米的盖玻片。在房间地板上方。9个计数方块中的每一个都保持0.0001毫升的体积。血细胞仪对测定细胞存活率很好，但对于确定细胞数并不精确。由于实际计数的细胞数量相对较少。自动计数器将产生值。可靠的数据，特别是当与血液细胞仪的生存数据结合使用时。

计算单元如下：

1。清洁，彻底干燥，并组装血细胞仪与覆盖滑动。

2。将少量细胞悬浮液转移到边缘两个计数室中的每一个的。允许单元格悬浮液进入计数室通过毛细管作用。

3。将血细胞计数器置于倒置状态显微镜下观察细胞100倍放大倍数。

4。聚焦于象限，标记为1, 2, 3，图2为4。

5。记录每个部分的单元格数量。平均值细胞数，稀释倍数因素。如果细胞没有被稀释，这个因素将10个细胞/ml。样品的任何稀释后从细胞悬液中取出，如使用生命污点，需要包括在计算中。

例如，如果四个计数为60, 66, 69，而75个，则浓度为68×10个细胞/ml。被加载到血细胞计数器的样本。为了达到效果，调整浓度。悬挂，使得50个到100个单元在四个部分中的每一个。大多数培养物将在初始接种细胞浓度范围从10μm至10μm细胞/cm生长。快速生长培养通常是在较低浓度下进行的。有些文化不好生长，除非Z初添加细胞的Z小浓度；详见产品表。

细胞活力：
生存力测定测量种群中活细胞的数量。当与总数相结合时细胞中，活细胞的数量为细胞培养的健康提供了准确的指示。Z多的普通和快速的方法依赖于细胞膜的完整性作为细胞活力的指示器。台盼蓝和erythrosin B（ATCC®第302504）染色均被活细胞主动排除，但均为被死亡细胞所占据和保留，缺少完整的膜。

虽然两种染色剂都以相同的方式使用，但ATCC推荐用赤藓红B代替台盼蓝。造血细胞当使用台盼蓝时，在使用前孵育细胞2至五分钟。如果没有在这个时间内计数，细胞将开始退化并吸收染料。Erythrosin B不需要潜伏期。

Erythrosin B染色产生更准确的结果，较少的假阴性和假阳性。赤藓红B染色溶液提供清晰的背景，不会像台盼蓝一样结合血清蛋白，使染色细胞更清晰，更容易识别。此外，微生物污染或沉淀物细胞培养更容易显现。，台盼蓝是有毒的，是潜在的致癌物。

对于任一染色，使用以下方向：
1。将细胞悬浮液1:1与PBS中0.1%的赤藓红B溶液或PBS中0.4%的台盼蓝溶液混合
2。将赤藓红B溶液中的细胞直接加载到干净、干燥的血球计中，但孵育台盼蓝溶液在装填前两至五分钟。
3。非活细胞将被染成红色（赤藓红B）或深蓝色（台盼蓝）。计算细胞存活率由于未染色或活细胞的数目除以细胞总数并表示为百分比。

传代单层细胞：
单分子膜生长的安克雷奇依赖细胞系需要定期进行传代培养。保持指数增长。当细胞接近指数增长结束时（大约70%）到90%汇合），它们准备进行传代培养。包括推荐的传代培养程序为每个ATCC细胞株提供分流比和介质补给（喂养）时间表。产品信息表。

单分子膜的继代培养涉及细胞间和胞内细胞对表面的破坏。债券。对于一些松散连接的细胞，用手掌向一侧猛烈撞击。烧瓶可以把它们移走。许多人需要用蛋白水解来消化蛋白质附着键。酶如胰蛋白酶/EDTA。对于一些细胞系，例如刮除细胞的机械力是优先考虑。在细胞被解离并分散到单细胞悬浮液后，它们被稀释。以适当的浓度和适当的生长转移到新鲜培养容器中它们会重新附着、生长和分裂的媒介。

下面的程序适用于大多数贴壁细胞系。然而，因为每个细胞系都是独特的，培养时间和温度、洗涤次数或溶液配方可能不同。在所有情况下，在分离过程中用显微镜不断观察细胞以防止损伤。解离溶液。在这个过程中使用的量是一个75厘米的烧瓶。调整音量适用于不同大小的血管。

注意：
本司复苏细胞货期要1-3周。长得好状态好时间久早。长得不好，要重新复苏所以时间会显得很长。敬请谅解！
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本司细胞质量可靠，售后有保障
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