Cold II pColdII 大肠杆菌蛋白表达载体 温度诱导

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pColdII载体基本信息

出品公司:	Takara
载体名称:	pCold II, pColdII, pCold-II
质粒类型:	大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:	高
启动子:	CSPA
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	4392 bp
5' 测序引物及序列:	pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3'
3' 测序引物及序列:	pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3'
载体标签:	N-His,
载体抗性:	Ampicillin 氨苄
备注:	温度诱导，冷休克蛋白表达载体
稳定性:	瞬时表达 Transient
组成型:	诱导表达
病毒/非病毒:	非病毒

 

pColdII载体简介

阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。GX率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛 使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。

为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个GX基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。

<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。

冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计GX率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因 子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。

全序列

1        AAGGAATGGT GTGGCCGATT AATCATAAAT ATGAAAAATA ATTGTTGCAT CACCCGCCAA
61       TGCGTGGCTT AATGCACATC AAATTGTGAG CGGATAACAA TTTGATGTGC TAGCGCATAT
121      CCAGTGTAGT AAGGCAAGTC CCTTCAAGAG TTATCGTTGA TACCCCTCGT AGTGCACATT
181      CCTTTAACGC TTCAAAATCT GTAAAGCACG CCATATCGCC GAAAGGCACA CTTAATTATT
241      AAGAGGTAAT ACACCATGAA TCACAAAGTG CATCATCATC ATCATCATAT GGAGCTCGGT
301      ACCCTCGAGG GATCCGAATT CAAGCTTGTC GACCTGCAGT CTAGATAGGT AATCTCTGCT
361      TAAAAGCACA GAATCTAAGA TCCCTGCCAT TTGGCGGGGA TTTTTTTATT TGTTTTCAGG
421      AAATAAATAA TCGATCGCGT AATAAAATCT ATTATTATTT TTGTGAAGAA TAAATTTGGG
481      TGCAATGAGA ATGCGCAGGC CCTTTCGTCT CGCGCGTTTC GGTGATGACG GTGAAAACCT
541      CTGACACATG CAGCTCCCGG AGACGGTCAC AGCTTGTCTG TAAGCGGATG CCGGGAGCAG
601      ACAAGCCCGT CAGGGCGCGT CAGCGGGTGT TGGCGGGTGT CGGGGCTGGC TTAACTATGC
661      GGCATCAGAG CAGATTGTAC TGAGAGTGCA CCATAAAATT GTAAACGTTA ATATTTTGTT
721      AAAATTCGCG TTAAATTTTT GTTAAATCAG CTCATTTTTT AACCAATAGG CCGAAATCGG
781      CAAAATCCCT TATAAATCAA AAGAATAGCC CGAGATAGGG TTGAGTGTTG TTCCAGTTTG
841      GAACAAGAGT CCACTATTAA AGAACGTGGA CTCCAACGTC AAAGGGCGAA AAACCGTCTA
901      TCAGGGCGAT GGCCCACTAC GTGAACCATC ACCCAAATCA AGTTTTTTGG GGTCGAGGTG
961      CCGTAAAGCA CTAAATCGGA ACCCTAAAGG GAGCCCCCGA TTTAGAGCTT GACGGGGAAA
1021     GCCGGCGAAC GTGGCGAGAA AGGAAGGGAA GAAAGCGAAA GGAGCGGGCG CTAGGGCGCT
1081     GGCAAGTGTA GCGGTCACGC TGCGCGTAAC CACCACACCC GCCGCGCTTA ATGCGCCGCT
1141     ACAGGGCGCG TACTATGGTT GCTTTGACGT ATGCGGTGTG AAATACCGCA CAGATGCGTA
1201     AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGTCAGGTG GCACTTTTCG GGGAAATGTG CGCGGAACCC
1261     CTATTTGTTT ATTTTTCTAA ATACATTCAA ATATGTATCC GCTCATGAGA CAATAACCCT
1321     GATAAATGCT TCAATAATAT TGAAAAAGGA AGAGTATGAG TATTCAACAT TTCCGTGTCG
1381     CCCTTATTCC CTTTTTTGCG GCATTTTGCC TTCCTGTTTT TGCTCACCCA GAAACGCTGG
1441     TGAAAGTAAA AGATGCTGAA GATCAGTTGG GTGCACGAGT GGGTTACATC GAACTGGATC
1501     TCAACAGCGG TAAGATCCTT GAGAGTTTTC GCCCCGAAGA ACGTTTTCCA ATGATGAGCA
1561     CTTTTAAAGT TCTGCTATGT GGCGCGGTAT TATCCCGTAT TGACGCCGGG CAAGAGCAAC
1621     TCGGTCGCCG CATACACTAT TCTCAGAATG ACTTGGTTGA GTACTCACCA GTCACAGAAA
1681     AGCATCTTAC GGATGGCATG ACAGTAAGAG AATTATGCAG TGCTGCCATA ACCATGAGTG
1741     ATAACACTGC GGCCAACTTA CTTCTGACAA CGATCGGAGG ACCGAAGGAG CTAACCGCTT
1801     TTTTGCACAA CATGGGGGAT CATGTAACTC GCCTTGATCG TTGGGAACCG GAGCTGAATG
1861     AAGCCATACC AAACGACGAG CGTGACACCA CGATGCCTGT AGCAATGGCA ACAACGTTGC
1921     GCAAACTATT AACTGGCGAA CTACTTACTC TAGCTTCCCG GCAACAATTA ATAGACTGGA
1981     TGGAGGCGGA TAAAGTTGCA GGACCACTTC TGCGCTCGGC CCTTCCGGCT GGCTGGTTTA
2041     TTGCTGATAA ATCTGGAGCC GGTGAGCGTG GGTCTCGCGG TATCATTGCA GCACTGGGGC
2101     CAGATGGTAA GCCCTCCCGT ATCGTAGTTA TCTACACGAC GGGGAGTCAG GCAACTATGG
2161     ATGAACGAAA TAGACAGATC GCTGAGATAG GTGCCTCACT GATTAAGCAT TGGTAACTGT
2221     CAGACCAAGT TTACTCATAT ATACTTTAGA TTGATTTAAA ACTTCATTTT TAATTTAAAA
2281     GGATCTAGGT GAAGATCCTT TTTGATAATC TCATGACCAA AATCCCTTAA CGTGAGTTTT
2341     CGTTCCACTG AGCGTCAGAC CCCGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTGA GATCCTTTTT
2401     TTCTGCGCGT AATCTGCTGC TTGCAAACAA AAAAACCACC GCTACCAGCG GTGGTTTGTT
2461     TGCCGGATCA AGAGCTACCA ACTCTTTTTC CGAAGGTAAC TGGCTTCAGC AGAGCGCAGA
2521     TACCAAATAC TGTTCTTCTA GTGTAGCCGT AGTTAGGCCA CCACTTCAAG AACTCTGTAG
2581     CACCGCCTAC ATACCTCGCT CTGCTAATCC TGTTACCAGT GGCTGCTGCC AGTGGCGATA
2641     AGTCGTGTCT TACCGGGTTG GACTCAAGAC GATAGTTACC GGATAAGGCG CAGCGGTCGG
2701     GCTGAACGGG GGGTTCGTGC ACACAGCCCA GCTTGGAGCG AACGACCTAC ACCGAACTGA
2761     GATACCTACA GCGTGAGCTA TGAGAAAGCG CCACGCTTCC CGAAGGGAGA AAGGCGGACA
2821     GGTATCCGGT AAGCGGCAGG GTCGGAACAG GAGAGCGCAC GAGGGAGCTT CCAGGGGGAA
2881     ACGCCTGGTA TCTTTATAGT CCTGTCGGGT TTCGCCACCT CTGACTTGAG CGTCGATTTT
2941     TGTGATGCTC GTCAGGGGGG CGGAGCCTAT GGAAAAACGC CAGCAACGCG GCCTTTTTAC
3001     GGTTCCTGGC CTTTTGCTGG CCTTTTGCTC ACATAGTCAT GCCCCGCGCC CACCGGAAGG
3061     AGCTGACTGG GTTGAAGGCT CTCAAGGGCA TCGGTCGAGA TCCCGGTGCC TAATGAGTGA
3121     GCTAACTTAC ATTAATTGCG TTGCGCTCAC TGCCCGCTTT CCAGTCGGGA AACCTGTCGT
3181     GCCAGCTGCA TTAATGAATC GGCCAACGCG CGGGGAGAGG CGGTTTGCGT ATTGGGCGCC
3241     AGGGTGGTTT TTCTTTTCAC CAGTGAGACG GGCAACAGCT GATTGCCCTT CACCGCCTGG
3301     CCCTGAGAGA GTTGCAGCAA GCGGTCCACG CTGGTTTGCC CCAGCAGGCG AAAATCCTGT
3361     TTGATGGTGG TTAACGGCGG GATATAACAT GAGCTGTCTT CGGTATCGTC GTATCCCACT
3421     ACCGAGATAT CCGCACCAAC GCGCAGCCCG GACTCGGTAA TGGCGCGCAT TGCGCCCAGC
3481     GCCATCTGAT CGTTGGCAAC CAGCATCGCA GTGGGAACGA TGCCCTCATT CAGCATTTGC
3541     ATGGTTTGTT GAAAACCGGA CATGGCACTC CAGTCGCCTT CCCGTTCCGC TATCGGCTGA
3601     ATTTGATTGC GAGTGAGATA TTTATGCCAG CCAGCCAGAC GCAGACGCGC CGAGACAGAA
3661     CTTAATGGGC CCGCTAACAG CGCGATTTGC TGGTGACCCA ATGCGACCAG ATGCTCCACG
3721     CCCAGTCGCG TACCGTCTTC ATGGGAGAAA ATAATACTGT TGATGGGTGT CTGGTCAGAG
3781     ACATCAAGAA ATAACGCCGG AACATTAGTG CAGGCAGCTT CCACAGCAAT GGCATCCTGG
3841     TCATCCAGCG GATAGTTAAT GATCAGCCCA CTGACGCGTT GCGCGAGAAG ATTGTGCACC
3901     GCCGCTTTAC AGGCTTCGAC GCCGCTTCGT TCTACCATCG ACACCACCAC GCTGGCACCC
3961     AGTTGATCGG CGCGAGATTT AATCGCCGCG ACAATTTGCG ACGGCGCGTG CAGGGCCAGA
4021     CTGGAGGTGG CAACGCCAAT CAGCAACGAC TGTTTGCCCG CCAGTTGTTG TGCCACGCGG
4081     TTGGGAATGT AATTCAGCTC CGCCATCGCC GCTTCCACTT TTTCCCGCGT TTTCGCAGAA
4141     ACGTGGCTGG CCTGGTTCAC CACGCGGGAA ACGGTCTGAT AAGAGACACC GGCATACTCT
4201     GCGACATCGT ATAACGTTAC TGGTTTCACA TTCACCACCC TGAATTGACT CTCTTCCGGG
4261     CGCTATCATG CCATACCGCG AAAGGTTTTG CGCCATTCGA TGGTGTCCGG GATCTCGACG
4321     CTCTCCCTTA TGCGACTCCT GCATTAGGAA GCAGCCCAGT AGTAGGTTGA GGCCGTTGAG
4381     CACCGCCGCC GC