人抗核糖体抗体试剂盒说明书

人抗核糖体抗体试剂盒说明书实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记 的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
产品名称: 人抗核糖体抗体试剂盒说明书
英文名称: Anti-rRNP ELISA Kit
英文缩写：Anti-rRNP
人抗核糖体抗体试剂盒说明书试剂配制
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人EPCR单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的EPCR与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中EPCR的浓度成正比。加入终止液终止反应，在 450 nm 波长测定吸光度值。                       实验方法：双抗夹心ELISA（定量）                                                                                                                         
样本类型：血清、血浆、细胞上清、组织等相关生物样本。                                                                                                 
规格型式：96孔板、48孔板，可拆卸                                                                                                                                             
保存条件：试剂盒未拆开，2-8℃保存。已拆开，标准品-20℃保存，其它2-8℃℃保存。                                                                           
有效期：6个月。                                                                                                                                                     
检测范围：0.312-20ng/ml。                                                                                                                                  
灵敏度：10.0pg/mL。敏感性/检测浓度计算方式：敏感性等于20个空白对照孔的平均O.D.值加上2个标准差后对应的浓度。样品的O.D.读数只有在高过敏感性指标的时候才具有统计学显著性。                                                                         变异系数：板内变异系数<10%,板间变异系数<15%。                                                                                                                                          
回收率：三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。
人抗核糖体抗体试剂盒说明书需用户自己提供的实验器材和试剂： 
1. 96孔读板仪器。
2. 自动洗板机.
3. 移液器和枪头。建议使用多通道移液器/排枪。
4. Eppendorf 管。
5. 额外洗板缓冲液 (neutral PBS 或 TBS。试剂盒内提供足量。如需额外缓冲液可参考如下配方)。
0.01M TBS: Add 1.2g Tris, 8.5g Nacl; 450μl of purified acetic acid or 700μl of concentrated hydrochloric acid to 1000ml H2O and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.0.01M PBS: Add 8.5g sodium chloride, 1.4g Na2HPO4 and 0.2g NaH2PO4 to 1000ml distilled water and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.*样品准备的相关试剂也不含在试剂盒中。
人抗核糖体抗体试剂盒说明书注意事项：
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。
土壤腐殖酸清除剂100mLSoil Humic Acid Erasol常温
一步离心式石蜡清除剂100次Paraffin Erasol常温
菌体内毒素清除剂200mLBacterial Endotoxin Erasol常温
红细胞裂解液A型 (核酸纯化) 100mLRed Cell Lysis Solution ,Type A4℃保存
红细胞裂解液B型 (流式细胞分析用) 100mLRed Cell Lysis Solution,Type B4℃保存
超氧化物歧化酶，人10kuSuperoxide Dismutase-20℃保存
β-琼脂糖酶Ⅰ100Uβ-AgaraseⅠ-20℃保存
β-琼脂糖酶Ⅰ500U
溶菌酶干粉10gLysozyme Powder4℃或-20℃保存
溶菌酶溶液，10mg/mL1.5mLLysozyme Solution-20℃保存
pMW292 ugpMW29低温运输，-20℃保存
pMXS Tomato2(799)2 ugpMXS Tomato2(799)低温运输，-20℃保存
pMXB102 ugpMXB10低温运输，-20℃保存
pMXs-IRES-GFP2 ugpMXs-IRES-GFP低温运输，-20℃保存
pMXmKate(650)2 ugpMXmKate(650)低温运输，-20℃保存
布氏杆菌(BS)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 78-5000 pg/mL
布氏杆菌(BS)核酸检测试剂盒 78-5000 pg/mL
猪肺炎支原体(MHP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 0.312-20 ng/mL
猪肺炎支原体(MHP)核酸检测试剂盒 0.312-20 ng/mL
西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 78-5000 pg/mL
甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 ENPP3 / CD203c 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 CL-K1 / COLEC11 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 KIAA1279 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 ADA / Adenosine deaminase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人抗核糖体抗体试剂盒说明书小鼠 CD209G 基因全长ORF克隆
小鼠 CTSK 基因全长ORF克隆
小鼠 LGALS3BP 基因全长ORF克隆
小鼠 VSIG1 基因全长ORF克隆
小鼠 TREML2 基因全长ORF克隆
人抗核糖体抗体试剂盒说明书操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。