禽流感病毒通用型RT-PCR试剂盒

产品名称：禽流感病毒通用型RT-PCR试剂盒
该产品运用PCR法的特点为：其特异性，灵敏度远高于ELASA 检测法，使用PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。
产品规格：10/50
产品用途：检测禽流感病毒
产品价格：由于网页规则限制，网页价格可能会有出入，具体准确价格，请联系我公司客服咨询。
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
有  效  期：六个月
       我公司PCR系列产品有：RNA纯化，DNA纯化，核酸电泳回收，探针标记与检测，核酸扩增，克隆表达等产品，蛋白质细胞生物与基因研究产品，质粒载体、微生物菌种、培养基、PCR检测试剂盒产品，原代细胞，传代细胞，gibco等进口大Pai血清。
禽流感病毒通用型RT-PCR试剂盒产品组成：

名称	50 头份	贮藏条件
裂解液	30 mL	室温（A 盒）
洗液	60 mL
洗脱液	10 mL
吸附柱和收集管	50 套
阴性对照	1 mL	-20 ℃（B 盒）
阳性对照	600 µL
无菌无核酸酶水	600 µL
RT-PCR 反应液	600 µL
酶混合液	24 µL
荧光探针	115 µL

样品制备
1 样品采集：病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸 道分泌物或排泄物，置于 50%甘油生理盐水中。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜， 严禁反复冻融。）
2  样品处理：每份样品分别处理。
2.1 组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约 1g，用手术剪剪碎混匀后取 0.05 g 于研磨器中研磨，加入 1.5 mL 生理盐水继续研磨，待匀浆后转至 1.5 mL 灭菌离心管中，8000 rpm 离心 2 min，取上清液 100 µL 于 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.2  全血样品处理：待血凝后取血清 100 µL，置 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.3  阳性对照处理：取阳性对照 100 µL，置 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.4  阴性对照处理：取阴性对照 100 µL，置 1.5 mL 灭菌离心管中。
禽流感病毒通用型RT-PCR试剂盒产品部分说明书如下，如下单独详细说明书和报价，请联系我们：
操作步骤
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液 600 µL，充分颠倒混匀，室温静置 3～
5 min。
1.2  将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时 堵塞吸附柱），13000 rpm 离心 30 s。
1.3  弃去收集管中液体，加入 600 µL 洗液，13000 rpm 离心 30 s。
1.4 重复步骤 1.3。
1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心 2 min，以除去残留的洗涤液。
1.6  将吸附柱移入新的 1.5 mL 离心管中，向柱ZY加入洗脱液 50 µL，室温静置 1 min，13000 rpm
离心 30 s，离心管中液体即为模板 RNA。
2 RT-PCR 扩增
每份总体积 20 µL，含 16.8 µL RT-PCR 反应液（用前混匀），1.2 µL 酶混合液，2 µL 模板 RNA。 例如：n 份样品，配制 n+1 份，16.8×（n+1）RT-PCR 反应液，再加入 1.2×（n+1）酶混合液，
混匀后取 18 µL 分装成 n 份，分别加入 2 µL 模板 RNA（阳性对照管加入 1 µL 阳性对照 RNA 和 1 µL X 液），加入矿物油 20 µL 覆盖（有热盖的 PCR 扩增仪不用加矿物油），作好标记。
在 PCR 扩增仪上进行以下程序：42 ℃ 45 min，95 ℃ 3 min；循环 95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃
30 s，共 35 次；再 72 ℃延伸 10 min。
3  电泳
称 3 g 琼脂糖放于 500 mL 锥形瓶中，加入 50 倍稀释的 TAE 电泳缓冲液 200 mL（取 4 mL 50 倍 TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至 200 mL），于微波炉中熔解，再加入 10 µL 染色液混匀。在电泳 槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将 PCR 扩增产物 10 µL 混合 2 µL 上样缓冲液，点样于 琼脂糖凝胶孔中，以 110～120V 电压于 50 倍稀释的 TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。
需自备的物品
1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、 微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。 2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌 1.5mL 离心管和吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、 灭菌双蒸水。
禽流感病毒通用型RT-PCR试剂盒注意事项
1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。
2．PCR  整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩 增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。
3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心 15 s， 使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立 即放回-20 ℃。
4．在 RNA 提取过程中，避免 RNA 酶污染，尽量缩短操作时间。
5． 染色液低毒，操作时应戴上手套，避光保存，较长时间不使用请存放于 4℃，以免挥发变干。 染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。
6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
7．严格遵守操作说明可以获得Z好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。
8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在 3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。
结果判定    
阳性对照出现 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。 被检样品出现扩增带为禽流感病毒阳性，否则为阴性。
1 结果分析条件设定 阈值设定原则：阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的点。不同仪器可根据仪器噪音
情况进行调整。
2  结果描述及判定
阳性对照 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线，阴性对照无 Ct 值并且无特定扩增曲线，实验结果成 立；被检样品 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线为  阳性；被检样品 30＜Ct＜37 并出现特定的扩 增曲线，需重新取样提取 RNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，可判定为阳性；被检样品 Ct 值≥37 时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性；对于某些未呈现 S 型曲线，但本底较高的样 品，应为阴性。
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