北京现货Cathepsin G mRNA原位杂交试剂盒厂家直销

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名称：北京现货Cathepsin G mRNA原位杂交试剂盒厂家直销
编号：ZN0207
规格：100T
品Pai：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.Cathepsin G mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Cathepsin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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SV1411 pTYB21 载体
BTN3092 *化乙锭清除剂(EB清除剂) EB scavenger
BTN111109 DOP-PCR试剂盒 Degenerate Oligonucleotide Primer PCR Kit
YT629 预染蛋白质分子量标准(19-117kD) Prestained Protein Marker
HR0041 胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒 Cytoplasmic protein/nuclear protein/histone Extraction Kit
KFS254 Hoechst 33342染色液
" Carboxy benzyl penicillin solution
SY0281 零背景TOPO-TA克隆试剂盒 Zero TOPO-TA Cloning Kit
KFS053 Cy3标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒
WE0309 TMB底物显色试剂盒(可溶型，20×) Soluble TMB Kit(20×)
SV0866 Quick-Load Taq 2X Master Mix
SY0770 兔免疫组化(IHC)检测试剂盒 Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody
WE0106 2×BAmp MasterMix(含染料) 2×BAmp MasterMix(With Dye)
YT322 DNA交联剂/细胞凋亡诱导剂(Cisplatin)(顺铂) cisplatinum；CPDC
SV1580 重亚硫*(代"酸")盐转化试剂盒
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SY0033 热启动DNA聚合酶 Hot Start DNA Polymerase
HR0249 内质网提取试剂盒 Endoplasmic reticulum Extraction Kit
BTN100603 银染清除剂 Silver Stain Scavenger
SV0206 BspCNI限制性内切酶 BspCNI Restriction Endonuclease
SY0392 His标签蛋白琼脂糖纯化树脂 Ni-NTA Agarose Resin
KFS156 细胞质标记染料,长效示踪CDCFDA,SE 5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester
RFT040 36KD蛋白Marker
SV1078 RecJf 核酸外切酶 RecJf exonuclease
BTN80802B 非冻型拭子DNA保存液(含专用拭子) DNAhold Swab RNA non-freezing preservation
WE0210 UltraStain核酸染料 UltraStain Nuclear Dye
YT431 硫*(代"酸")卡那霉素(细菌培养用) Kanamycin sulfate
ALH041 酵母RNA提取试剂盒 Yeast RNA rapid extraction kit
BTN120512 即用型蓝白T载体B型(T7-T3，有MCS) Instant Blue-White Vector T，Type B
YT222 CREB凝胶迁移突变探针(10μM) CREB Mutation Probe For EMSA(10μM)
SY0137 RORα2-Luc荧光素酶报告基因质粒 RORα2 Luciferase Reporter Plasmid
HR0441 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Cell apoptosis morphology detection kit
BTN130616 Bsu DNA聚合酶，大片段 Bsu DNA Polymerase，Large Fragment
YT872 封闭液(用PBS配置，含吐温20) Blocking Buffer(PBS)
SY0498 Hoechst 33258 染液(即用型)
KFS259 吖啶橙AO染色试剂盒 Cell Apoptosis Acridine Orange Detection Kit
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·人巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)(CCL3)检测试剂盒
编号：ZN2323
英文名称：Human Macrophage inflammatory protein 1 alpha ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中MIP-1α的含量。预先包被的抗体是MIP-1α单克隆抗体。检测相抗体是MIP-1α多克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的MIP-1α呈正相关。

MIP-1α和MIP-1β都是单核细胞的趋化蛋白质。此外，MIP-1蛋白还对淋巴细胞有趋化和吸附作用，尤其是CD4+和CD8+T细胞。本试剂盒所用标准品为重组人MIP-1α，66个*基酸，分子量7.5KDa。

检测指标：MIP-1 alpha；MIP-1α；CCL3
检测范围：15.6pg/ml～1000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜1pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人MIP-1α抗体的96孔板	96T	1板
重组人MIP-1α标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗人MIP-1α(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	15.6	31.2	62.5	125	250	500	1000
OD值	0.136	0.218	0.306	0.472	0.734	1.090	1.758	2.233

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