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小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格

产品信息
  • 特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

    北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格在内的ELISA试剂盒产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。


    名称:小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格
    编号:ZN2682
    规格:96T
    英文名:Mouse Lipopolysaccharide-binding protein ELISA Kit
    品Pai:百奥莱博
    产地:北京
    本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中LBP的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是LBP多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠LBP呈正相关。

    LBP是一种糖蛋白,属于I型急性期反应蛋白,与脂多糖(LPS)的类脂A部分具有高度亲和性。LBP具有致炎和KY的双重作用。

    检测指标:LBP
    检测范围:1.56ng/ml~100ng/ml
    特异性:系统和其它细胞因子无交叉反应
    敏感性:<60pg/ml

    产品组成:

     
    组分 规格 数量
    预包被抗小鼠LBP抗体的96孔板 96T 1板
    重组小鼠LBP标准品(冻干) 100ng/管 2管
    生物素标记抗小鼠LBP(100X) 130μl 1管
    亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X) 130μl 1管
    样品稀释液 30ml 1瓶
    抗体稀释液 12ml 1瓶
    ABC稀释液 12ml 1瓶
    TMB显色液 10ml 1瓶
    TMB终止液 10ml 1瓶
    洗涤缓冲液(25X) 20ml 1瓶
    封板膜   4张


    储存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)
    有效期: 6个月(4℃);12个月(-20℃)

    样品的准备和保存:
    样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
    细胞培养上清:离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
    血清:用干净试管收集血液,室温凝固30分钟,1500×g离心15分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
    血浆:采用肝素或EDTA抗凝,抽血后30分钟内在2-8℃温度下,1500×g离心15分钟。为消除血小板的影响,建议在2-8℃进一步10000×g离心10分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
    细胞裂解液:对于贴壁细胞,去除培养液,PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后,细胞就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

    样品稀释的一般原则:
    用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同,分别采取不同的稀释方案:
    高:指待测因子在10~100ng/ml,一般按1:100稀释,297μl样品稀释液加3μl样品。
    中:指待测因子在1~10ng/ml,一般按1:10稀释,225μl样品稀释液加25μl样品。
    低:指待测因子在15.6~1000pg/ml,按1:2稀释,100μl样品稀释液加100μl样品。
    特低:指待测因子≤15.6pg/ml,样品一般不做稀释,或按1:2稀释。
    以上方案仅供参考,样品的稀释应有详细记录。

    参考标准曲线数据:(取自某一批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线)
    浓度(ng/ml) 0 1.56 3.12 6.25 12.5 25 50 100
    OD值 0.028 0.364 0.743 1.128 1.235 1.417 1.734 1.912


    更多有关小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:

    ·TLR7 mRNA原位杂交试剂盒
    编号:ZN1406
    规格:100T
    基本信息:
    保存条件:4℃保存一年
    工作量:100张切片。
    有效期:一年。
    适用种属:human
    标记方式:3’—尾段标记
    试剂盒中内容:
    1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
    2.预杂交液2ml;
    3.TLR7 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml;
    4.封闭液5ml;
    5.生物素化鼠抗Digoxin5ml;
    6.SABC-POD 5ml;
    7.生物素化过氧化物酶5ml。
    用户自备试剂:
    原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
    缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用PBS)
    一.培养细胞和冰冻切片
    准备工作:
    固定液:4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
    3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
    2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
    0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
    0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
    20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
    原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
    操作程序:
    注意:Z重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
    1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
    2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
    3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
    4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
    5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
    7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
    8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
    9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
    10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
    11.滴加生物素化鼠抗Digoxin:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
    14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
    15.必要时苏木素复染,充分水洗。
    16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
    二.石蜡切片
    如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
    1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
    2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
    3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
    结果观察:
    TLR7的细胞胞浆着色呈棕黄色。
    注意事项:
    由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。


    小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格关键词:Mouse Lipopolysaccharide-binding protein ELISA Kit,小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒,ZN2682


    ·Nociceptin mRNA原位杂交试剂盒
    编号:ZN1004
    规格:100T
    基本信息:
    保存条件:4℃保存一年
    工作量:100张切片。
    有效期:一年。
    适用种属:rat
    标记方式:3’—尾段标记
    试剂盒中内容:
    1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
    2.预杂交液2ml;
    3.Nociceptin mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml;
    4.封闭液5ml;
    5.生物素化鼠抗Digoxin5ml;
    6.SABC-POD 5ml;
    7.生物素化过氧化物酶5ml。
    用户自备试剂:
    原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
    缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用PBS)
    一.培养细胞和冰冻切片
    准备工作:
    固定液:4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
    3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
    2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
    0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
    0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
    20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
    原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
    操作程序:
    注意:Z重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
    1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
    2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
    3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
    4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
    5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
    7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
    8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
    9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
    10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
    11.滴加生物素化鼠抗Digoxin:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
    14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
    15.必要时苏木素复染,充分水洗。
    16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
    二.石蜡切片
    如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
    1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
    2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
    3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
    结果观察:
    Nociceptin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
    注意事项:
    由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。


    小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒现货价格关键词:Mouse Lipopolysaccharide-binding protein ELISA Kit,小鼠脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒,ZN2682


    ·AP/intestinal mRNA原位杂交试剂盒
    编号:ZN0071
    规格:100T
    基本信息:
    保存条件:4℃保存一年
    工作量:100张切片。
    有效期:一年。
    适用种属:human,rat,mouse
    标记方式:3’—尾段标记
    试剂盒中内容:
    1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
    2.预杂交液2ml;
    3.AP/intestinal mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml;
    4.封闭液5ml;
    5.生物素化鼠抗Digoxin5ml;
    6.SABC-POD 5ml;
    7.生物素化过氧化物酶5ml。
    用户自备试剂:
    原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
    缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用PBS)
    一.培养细胞和冰冻切片
    准备工作:
    固定液:4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
    3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
    2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
    0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
    0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
    20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
    原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
    操作程序:
    注意:Z重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
    1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
    2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
    3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
    4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
    5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
    7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
    8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
    9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
    10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
    11.滴加生物素化鼠抗Digoxin:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
    14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
    15.必要时苏木素复染,充分水洗。
    16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
    二.石蜡切片
    如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
    1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
    2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
    3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
    结果观察:
    AP/intestinal的细胞胞浆着色呈棕黄色。
    注意事项:
    由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。



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