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5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)折扣价

产品信息
  • 特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

    北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)折扣价在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。


    名称:5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)折扣价
    编号:RFT071
    规格:10×1ml
    品Pai:百奥莱博
    产地:北京
    本品是以*酚蓝为染料,5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT,可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂,通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离,经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

    产品特点:
    1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。
    2、本试剂含有DTT,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
    3、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体ZL。

    操作步骤:
    1、将5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
    2、将蛋白样品置于95℃中加热3-5分钟。
    3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000 rpm的条件离心30秒。
    4、离心后,以微量进样器取适量上清,直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。
    5、进行常规电泳,通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。

    储存条件:-20℃。

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    WE0279 Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
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    RFT160 5M甜菜碱溶液(PCR级) 5M Betaine Solution(PCR Grade)
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    YT597 色*酸酶 Tryptophanase (Crude Enzyme)
    BTN121205 CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒 Cell Counting Kit-8
    BTN100307D 酸洗玻璃珠(800μm) Acid-Washed Glassbeads(800μm)
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    BTN131179 核酸稀释液,测OD专用 Diluent for NA OD Detection
    SY0505 磺酰罗丹明B(SRB)细胞增殖和毒性检测试剂盒 SRB Cell Proliferation and cytotoxicity assay kit
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    WE0175 柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1~20ml) Blood Genomic DNA Mini Extraction Kit(0.1-1ml)
    HR0454 EB染色试剂盒 EB Staining Kit
    SY0147 PPARγ-Luc报告基因慢病毒颗粒 Lentivirus PPARγ Luciferase Reporter
    BTN100905 8M盐*(代"酸")胍溶液(RNase-Free)
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    ·高保真平末端pfu DNA聚合酶
    编号:RFT101
    英文名称:pfu DNA Polymerase
    规格:100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
    本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶,该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外,还具有很强的3’-5’外切酶活性,增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比,pfu聚合酶热稳定性更好,更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A,为平滑末端,要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

    试剂盒组成:
    pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
    10×pfu PCR buffer(含Mg2+)—————————1ml

    活性定义:1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

    贮存液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

    使用方法:
    1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

     
    成分 20μl反应体系 50μl反应体系 终浓度
    Template 0.04-0.2 μg 0.1-0.5 μg as you wish
    Primer 1(10μM) 0.4μl 1μl 0.2μM
    Primer 2(10μM) 0.4μl 1μl 0.2μM
    10×pfu PCR buffer(含Mg2+) 2μl 5μl
    dNTP Mixture(10 mM) 0.4μl 1μl 200μM each
    pfu (2.5 U/μl) 0.4μl 1μl 0.05U/μl
    ddH2O up to 20μl up to 50μl -

    注1:如果需要改变Mg2+浓度,根据下表调节
    PCR反应体系中Mg2+终浓度 2 mM 2.5 mM 3 mM 4 mM
    20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0μl 0.4μl 0.8μl 1.6μl
    50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 0μl 1μl 2μl 4μl

    注2:配制反应液时,请加入pfu,因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性,有可能降解引物。
    2、混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。
    3、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
    4、PCR仪上执行以下程序:
    步骤 温度 时间 循环数
    初始变性 94℃ 3-5 min 1
    变性 94℃ 30 sec 25-40*
    退火 50-60℃* 30 sec
    延伸 72℃ 0.5kb/min*
    延伸 72℃ 5 min 1

    注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定的反应条件(温度、时间等)。

    注意事项:
    1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性,所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb;同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物,所以应把pfu 酶到反应体系中,并立即进行 PCR 反应。
    2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对 pfu 酶的活性无影响。

    储存条件:-20℃,有效期一年。



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    温馨提示:不可用于临床ZL。
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