TNFAIP 3 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括TNFAIP 3 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：TNFAIP 3 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能
规格：100T
编号：ZN1415
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.TNFAIP 3 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
TNFAIP的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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ARB11834 人醛固酮(ALD)检测服务 Human aldosterone,ald ELISA KIT
BTN80911 蛋白酶K溶液 Proteinase K Solution
BFD026 呋*(代"喃")西林快速检测试剂盒
ARB11682 人超敏游离雌三醇(uE3)ELISA检测服务 Human ultra estriol,ue3 ELISA KIT
ARB12647 大鼠窖蛋白CAveolIn1(CAv-1)血清中含量检测 Rat caveolin-1,cav-1 ELISA KIT
茶碱 L-(+)-2-Chlorophenylglycine 58-55-9
PY02-163  XLD琼脂  250克  
尿胰蛋白酶YZ剂 BTB 164859-77-2
9050-94-6 葡聚糖凝胶G-100 Sephadex G-100medium
ARB13318 山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量检测 Goat tumor necrosis factor α,tnf-α ELISA KIT
504-17-6 2-Thiobarbituric acid 硫代巴比*(代"妥")酸
ARB12012 大鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)含量测试 Rat toll-like receptor 9,tlr-9 ELISA KIT
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铁检测试剂盒(亚铁嗪微板法)   100T
SJ0233 RPMI 1640
F030407 胶体金标记山羊抗小鼠IgG2b抗体 Goat Anti-Mouse IgG2b*GOLD
免疫血清防腐剂  10× 50ml
PY04-075  *霉素溶液  10mg/支×10支  "  每支添加于100ml孟加拉红琼脂培养基基础中。
ARB13797 豚鼠免疫球蛋白E(IgE)酶免分析 Guinea pig immunoglobulin e,IgE ELISA KIT
PY01-018  牛胆酸*  25克  
BTN130537 *蛋白酶YZ剂Ⅰ溶液 Calpain InhibitorⅠSolution
ARB11634 人淋巴细胞因子酶标法分析 Human lymphocyte factor ELISA KIT
ARB13014 小鼠克拉拉细胞蛋白(CC16)含量分析 Mouse clara cell protein,cc16 ELISA KIT
胞浆/胞核分离试剂盒   50T|100T
ARB11843 人凝血因子Ⅻ(FⅫ)elisa检测说明书 Human coagulation factor Ⅻ,fⅫ ELISA KIT
004001 小牛胸腺DNA
考马斯亮蓝快速染色液   "100ml
BTN81214 Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(干粉) Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer
BTN120708 凝血酶 Thrombin
E0611 抗凝裂解绵羊血(无菌)
PY02-180  赖*酸脱羧酶培养基  5克  
BTN90307 青链霉素溶液 Penicillin-Streptomycin Solution
E0610 抗凝裂解山羊血(无菌) 100ml/500ml
BL1142 支原体检测试剂盒
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·超灵敏免疫组化试剂盒(抗兔/小鼠IgG-HRP)
编号：ZN1864
规格：3ml/6ml/12ml/50ml
适于一抗来源为兔/小鼠的抗体
产品规格：3ml/6ml/12ml
保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。
工作原理：
用聚合标记方法将过氧化物酶连接到二抗上，形成类似于章鱼的超大分子抗体-酶聚合物，替代传统方法中的二抗和三抗。这种聚合物拥有强大的信号放大能力，同时有很强的组织细胞渗透力，特别适合免疫组化的应用。此系列检测试剂与传统的三步法比较具有简单，快速，高敏感，低背景等特点。
试剂盒内容:
1．5%BSA 封闭液 3ml/6ml/12ml
2．聚合 HRP 标记抗兔/小鼠 IgG 3ml/6ml/12ml
3．3%H2O2 3ml/6ml/12ml
石蜡片染色步骤:
1．石蜡切片，常规脱蜡至水。
2．3%H2O2 去离子水室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗，5分钟×3次。
3．根据需要选择抗原修FF式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4．封闭。滴加 5%BSA 封闭液，37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。
5．滴加一抗(兔/小鼠 IgG)，37℃孵育1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗，5分钟×3次。
6．滴加聚合 HRP 标记抗兔/小鼠 IgG,37℃孵育30分钟，PBS 冲洗，5分钟×3次。
7．显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB或 AEC。自来水充分冲洗。
8．根据需要进行苏木素复染，染色时间为0.5-2分钟。脱水，透明。
9．选用中性树胶，水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
建议：
1．热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
2．酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。

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