北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发
规格：5ml
英*(代"文")名：Fast TaqMan Mixture(Low ROX)
品Pai：百奥莱博
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效YZ了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发正在火爆，除此之外，为您推荐下别产品：

·50×TAE
编号：WE0216
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·TBS(pH8.0,10×)
编号：WE0313
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·UltraStain DNA Marker
编号：WE0242
规格：100次(500μl)|500次(5×500μl)
  本产品在常规Super DNA Ladder中添加了UltraStain染料，该染料是一种生物大分子，不能穿透细胞膜进入细胞内。相对于EB的强诱变性，是一种安全无毒的核酸染料。使用本产品时，在制胶过程中无需加入EB等核酸染料，可直接将Marker上样，即可进行凝胶电泳。由于UltraStain与EB具有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置，在正常紫外光激发检测即可，使用非常方便和灵活。

自备试剂：琼脂糖；TAE/TBE电泳缓冲液(WE0216S/WE0215S)；6×UltraStain Loading Buffer(WE0211S)

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、进行电泳时，由于凝胶中不需要额外添加核酸染料，其他待检测的DNA样品可使用本公司的6×UltraStain Loading Buffer进行制样和电泳。
2、由于该染料无需加入到凝胶中，可使制备的凝胶保存时间更长。

操作步骤：
1．配置合适浓度的不含核酸染料琼脂糖凝胶。
2．吸取5μl本产品直接电泳于上样孔内，进行常规电泳和图像采集。



将本产品分别电泳5μl /2.5μl，在不加染料的TAE缓冲液配置的琼脂糖凝胶中的电泳图。

储存条件：2～8℃避光


北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发关键词：WE0152,荧光探针,Fast TaqMan Mixture(Low ROX),低含量ROX校正染料,快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)

BTN120623 β-琼脂糖酶Ⅰ β-AgaraseⅠ
卡托普利 Maleic acid sodiu*(代"m") salt 62571-86-2
ARB12032 大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)酶标法分析 Rat amyloid beta Peptide 1-40,aβ1-40 ELISA KIT
ARB12051 大鼠儿茶酚胺(CA)血清中含量检测 Rat catecholamine,ca ELISA KIT
戊二醛固定液(4%)   100ml|500ml
ARB11397 人神经肽Y(NPY)elisa测定使用说明书 Human neuroPeptide y,np-y ELISA KIT
ARB10486 人白介素27(IL-27)ELISA代测服务 Human interleukin 27,IL-27 ELISA KIT
NF-267 HBS阳性对照
D-半胱*酸 Tetraheptylammonium bromide 921-01-7
F050317 狗IgG抗体 Dog IgG
ARB11204 人组织蛋白酶K(cAth-K)定量分析 Human cathepsin k,cath-k ELISA KIT
ARB11390 人冠状病毒(CoronAvIruses IgG)Elisa分析 Human coronaviruses igG ELISA KIT
马脾铁蛋白 Sodium D-pantothenate 9007-73-2
ARB10135 人P53抗体(P53-Ab)ELISA检测服务 
ARB11679 人超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa测定使用说明书 Human high sensitivity c-reactive protein,hs-crp ELISA KIT
猪胆盐 POPSO 8008-63-7
北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发关键词：WE0152,荧光探针,Fast TaqMan Mixture(Low ROX),低含量ROX校正染料,快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)


·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0178
英*(代"文")名称：Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌中提取高纯度总DNA，也适用于真菌等样本。本试剂盒每次可处理106-108个细胞，获得多至20μg总DNA。纯化过程中不需*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，一小时内即可获得高纯度DNA。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNAGX特异的结合到硅基质离心吸附柱上，而其他污染物可流过膜，PCR和其他酶促反应的YZ剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

产品特点：
1、适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等样品中分离纯化基因组DNA。
2、无需使用有机溶剂，彻底去除污染物以及下游反应YZ物，快速提取高品质DNA。

自备试剂：无水乙醇；提取革兰氏阳性菌需自备Enzymatic Lysis Buffer。
Enzymatic Lysis Buffer配制方法：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2-EDTA，pH8.0；1.2% Triton X-100。121℃灭菌处理20分钟，加入适量的Lysozyme(溶菌酶)其终浓度为20mg/ml。详细配制方法可登录百奥莱博网站，搜索WE0178S产品查询。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组，建议在对数生长期早期收集样品。
4、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀出现，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、如果提取样品为革兰氏阳性菌，需客户自行配制Enzymatic Lysis Buffer处理菌体，其中需使用浓度为20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)，Lysozyme本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0214S。

操作步骤：

一、革兰氏阴性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，Z多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、向沉淀中加入180μl Buffer GTL，振荡使菌体重悬。
3、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋混匀，56℃孵育，直至溶液变清亮，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀。加200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入，震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
5、将步骤4所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μlBuffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

二、革兰氏阳性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，Z多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。Enzymatic Lysis Buffer配制方法见说明书前部分自备试剂。
3、37℃孵育30分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 涡旋震荡，充分混匀。加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀。
注意：不要把蛋白酶K 直接加到Buffer GL中。
5、56℃孵育30分钟。
注意：
1)如果需要，95℃孵育15分钟可以使病原体失活，但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
6、加入200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
7、将步骤6所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤9。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新离心管(自备)中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司正在火爆促销核酸扩增(PCR)系列产品，欢迎您的垂询选购北京现货快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)批发。