Tris饱和酚-氯仿-异戊醇混合液(DNA提取用)促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)促销
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Phenol-Chloroform-Isoamylol
规格：250mL
编号：BTN100805B
本产品是Tris饱和酚和*仿和异戊醇的25:24:1的预混液，可以替代Tris饱和酚，用于抽提核酸，去除其中的蛋白质和脂溶性物质。跟Tris饱和酚相比，它不再需要*仿抽提。同时使用本产品不容易产生倒相现象(就是*酚相在上层，水相在下层)。A型pH＜5.0，为RNA提取专用；B型pH＞7.8，为DNA提取专用。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

相关知识：
Q：*酚提取法的局限在哪里？
A：酚提取法的局限是不能去除核酸以外的其他水溶性的多糖和糖蛋白(Howe曾经用酚提取法来提取糖蛋白，文献见Meth. Enzymol. 28，236，1972)，所以在用酚提取+醇沉淀法从富含多糖的样品(如植物)和富含糖蛋白的样品(如血液、软骨)中提取DNA或RNA时，很容易产生多糖污染。

Q：离心后为何*酚相消失？
A：酚跟水互溶，互溶比例跟温度、离子强度、去污剂浓度相关有时(如65℃时)可以达到彻底互溶。酚相消失可能就是上述原因造成，由于液体成本一般不能随意改动，所以解决办法一是用冷冻离心机、二是增加酚的用量、三是直接使用酚-*仿-异戊醇混合液，将酚抽提和*仿抽提合二为一。

Q：饱和酚为何呈淡黄色或棕色？
A：*酚本身是无色，但为了防止其氧化，一般加入了一定比例的抗氧化剂8-羟基喹*(代"啉")，后者是淡黄色或棕色(取决于浓度)，所以酚也呈淡黄色或棕色。

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·酵母产孢培养基
编号：BTN130902
英文名称：Sporulation Medium
规格：250mL
本产品由1% KOAc和2%的琼脂组成，用于MATa/MATa二倍体细胞不经过营养生长的过程直接在18-24小时后产孢。如果二倍体细胞是营养缺陷性，则还需要补充加入营养成分。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)
编号：BTN81026
英文名称：One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit
规格：10次
TUNEL就是末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)，它是一种高灵、敏度、快速检测细胞凋亡的方法。其原理是在发生凋亡细胞中会有大量的具有切口的DNA片段、或具有游离3´-OH端、长度是180-200bp倍数的DNA片段，TdT(末端脱氧核苷酸转移酶)可以以不依赖模板的方式进行标记，如参入荧光素、生物素或地高*(代"辛")等标记的dUTP，而正常细胞DNA几乎没有游离的3´-OH和切口，所以通过对标记物的显色反应和荧光显微镜或流式细胞仪检测就可以区分正常和凋亡的细胞。

试剂盒特点：
1．一站式，不需要额外准备专用的试剂(但客户还是需要自备常规的试剂，如水、PBS和细胞涂片所需试剂)。
2．高灵敏度，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，适合检测早期的细胞凋亡。
3．特异性高，只标记凋亡细胞，而不标记坏死细胞。
4．快速，整个操作过程仅需1-2个小时即可完成。
5．方便，一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
6．适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)，本试剂盒足够处理十张切片使用。

试剂盒组成：

 

成分	规格
1×TdT Buffer	0.5ml
TdT酶(20U/μL)	10μl
蛋白酶K溶液(200μg/mL)	1ml
Streptavidin-HRP	50μl
DAB干粉	1mg
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、样本预处理(操作步骤仅供参考，本试剂盒不提供相关试剂)
下面所用的固定液、淬灭液和通透液均需要新鲜配制。固定液是溶于pH7.4的PBS中的、浓度为4%的多聚甲醛溶液；淬灭液是用甲醇将H2O2原液(30%)稀释到3%而得；通透液是溶于0.1%柠檬酸*中的、浓度为0.1%的Triton X-100溶液。

对贴壁细胞或细胞涂片
1．将自然晾干的贴壁细胞或细胞涂片浸入固定液中室温固定30-60分钟。为改善细胞的渗透性，可将固定好的样本放在70%乙醇中-20℃放置过夜。为防止样本脱落，可使用硅烷处理的载玻片或采用多聚赖*酸铺片。
2．用自备的PBS漂洗2次，每次5分钟。
3．浸入淬灭液中室温放置10分钟后，用PBS漂洗2次，每次5分钟。
4．浸入通透液中，冰上放置2分钟后，用PBS漂洗 2次，每次5分钟。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
对石蜡组织切片
1．将切片置于染缸中，用二甲*脱蜡2次，每次5分钟；再分别用、95%、90%、80%、70%的乙醇和PBS各洗一次，每次3分钟。
2．在每张切片上滴加100μl蛋白酶K工作液(10μl蛋白酶K溶液+90μlPBS缓冲液)并在室温放置15-30分钟以降解交联的蛋白和其他内源蛋白。注意：蛋白酶K工作液的用量和处理时间一般都需根据样品的不同而单独进行优化，此处的用量只供参考。蛋白酶K处理后不需要再淬灭内源蛋白酶。
3．用PBS漂洗4次，每次3分钟。此步不能省略，否则残留的蛋白酶K将会降解后面降压加入的TdT。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
对冰冻切片
1．将切片在固定液中室温固定20-60分钟，PBS洗涤2次，每次10分钟。
2．浸入淬灭液中室温放置10分钟后，用PBS漂洗两次，每次5分钟。
3．浸入通透液中冰上放置2分钟后，用PBS漂洗两次，每次5分钟。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
阳性对照样本
所有处理步骤跟样品一样，只是在还需在样品上滴加100μL自备的DNase I反应液室温放置10-30分钟。反应液含40mM Tris-HCl pH7.9，10mM NaCl，6mM MgCl2，10mM CaCl2和不同浓度的DNaseI(冷冻切片需3U/mL、石蜡切片需1500 U/mL、一般样本需10U/mL)。用PBS洗两次，每次5分钟。用吸水纸吸干周围水分后待用。

二、标记和显色反应
1．配制所需量的TdT酶反应液：将1μl TdT酶加入到 50μl 1×TdTBuffer中即可。TdT酶反应液需即用即配，不宜保存，否则酶会失活。
2．在除阴性对照外的每个样本上滴加50μl TdT酶反应液，加盖玻片后37℃避光放置60分钟。注意：加盖玻片可使反应液均匀分布，并避免其挥发。阴性对照只滴加50μl不含TdT酶的反应液。
3．用自备的PBS清洗3次，每次 5分钟，用吸水纸吸干样本周围残留液体。
4．将5μl Streptavidin-HRP溶液加入45μl PBS中，混匀后全部加在切片上并加盖玻片，37℃避光放置30分钟。
5．用自备的PBS清洗4次，每次5分钟，用吸水纸吸干样本周围残留液体。
6．滴加50μl 新鲜配制的DAB工作液(将1mg DAB干粉溶于1mL PBS中，取50μL与1μl 30% H2O2混合即得DAB工作液，剩余的DAB溶液可-20℃避光保存)，室温显色10分钟。
7．PBS漂洗4次，前3次每次1分钟，1次5分钟。
8．光学显微镜下观察、拍照。亦可用苏木素或甲基绿复染复染后再观察。

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