cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)北京价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)北京价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)北京价格
品Pai：百奥莱博
英文名：1st-Strand cDNA Synthesis Kit
产地：国产|进口
编号：BTN60906
本试剂盒提供合成cDNA链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. Z长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联*(代"系"))
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

我公司的cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)北京价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·去离子水
编号：BTN81209
英文名称：Deionized water
规格：250mL

·湿法电转液(干粉)
编号：BTN100928
英文名称：Wet Transfer Buffer Powder
规格：20L
本产品配制的溶液适用于湿转时，湿润、浸泡电转膜及垫子和用作电转工作缓冲液。用前直接加入蒸馏水与甲醇混匀即可。不含有机溶剂，便于储存和运输，且操作简便，一般适合分子量在100KD以上的蛋白。本产品可以回收重复使用2-3次，节约研发成本，如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·电泳级Tricine干粉
编号：BTN90311
英文名称：Tricine，EG Powder
规格：100g
本产品是电泳级的Tricine，即三(羟甲基)甲基甘*酸，主要用于多肽电泳时替代SDS-PAGE中的Glycine，故又叫Tricine-SDS-PAGE电泳。主要用于配制电泳液。


储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

·全血直接扩增Taq DNA聚合酶
编号：BTN130606
英文名称：Blood-Direct Taq Polymerase
规格：100次
本产品是截短后的Taq DNA聚合酶，它缺失了N端的280个*基酸。本产品还有其它突变，这些突变使它能够耐受全血中存在的YZ剂。此酶能够扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先提纯。本产品在25μl的反应体系中能够耐受高达10%的全血(50μl反应体系中耐受20%)。

产品特点：
1．无需对DNA提纯；
2．聚合能力强；
3．适合诊断用PCR；
4．在大多数抗凝剂存在下依然表现良好，包括肝素，柠檬酸和EDTA；

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·taq酶抗体
编号：BTN130815
英文名称：Taq Antibody
规格：500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体，其与Taq酶结合后YZDNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时，高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合YZDNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效YZ引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应Z初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合，25℃，10 min温浴后，在55℃，10 min条件下YZ90％以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

纯度：
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S，23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下，无Mouse Genomic DNA的污染。


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·常态细胞转化液(免感受态细胞制备)
编号：BTN51101
英文名称：Tranzol
规格：20次
本品能使各种常态的E.coli细胞直接用于快速转化实验，使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备，保存和运输等繁琐的事情而操心，大大地缩短了基因克隆实验的时间，提高使用者的工作效率。

产品特点：
1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。
2. 常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等。
3.适用菌种和质粒广泛,用过的E.coli菌种包括K12 系的DH5a和Tg1，B 系的BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM，pET和Clion系列等。
4.转化效率适中，使用10ng质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在10E5 到10E6 CFU/ug质粒之间),使用3-5μL连接液转化一般能得几千个转化子,足够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。
5. 单管快速操作，整个操作可以在一个1.5mL塑料离心管中进行，Z短可以在三十分钟内完成，不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用于自动化的大规模克隆筛选工作。
6. 稳定性好，本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受态细胞在同样条件下会迅速失去活性。
 

成分	规格
常态转化液	1ml
阳性对照(pGEM3或pUC19)10μL,1ng/μL	5T
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记无菌的1.5mL塑料离心管并加入1mL液体培养基(如SOC或LB)，每次转化试验Z好加上阳性对照(用提供的pGEM3或其他质粒)和阴性对照(不加DNA)各一个。
2. 如果使用E.coli菌落,则直接用接种环,无菌牙签或无菌吸头从培养皿上挑取1-5个菌落(直径在3-5 mm之间)到每个离心管中，用移液枪轻柔吹打散开。如果使用甘油菌种保存液,则直接取50-100μl菌种液到1mL培养液中。如果使用单个菌落培养得到的新鲜培养液，则取1mL培养了3-4小时的菌液直接从第4步开始。
3. 37℃保温1小时(如果保温时间延长到3-4小时，可以提高转化效率一倍，但过长则转化效率又开始降低)。
4.室温10000rpm离心1分钟后小心移弃上清(液体培养基)，离心速度低于10000rpm则细菌沉淀易丢失。沉淀的细菌约芝麻或麦片大小为宜。细胞过多或过少都不好。
5. 短暂离心，用移液枪小心将残留的培养液(约50μl)吸出，否则残留培养基将会严重影响转化效率，故此步不能省略。
6. 加入50μl 冰浴的Clion转化液并小心将细胞吹打均匀。
7. 加DNA样品。在样品管中加入1-5μl连接反应液并轻柔吹打均匀；在阳性对照管中加入5 ng阳性质粒(没被酶切的载体，也可以使用常用的pGEM，pUC，pBR322等质粒)；在阴性对照管中加入连接反应的阴性对照，如果没有则不加入任何溶液或加入1-5μl无菌水。
8. 将上述离心管置于-20℃直到液体凝固为止(一般需要20分钟到1小时)，然后冰浴放置5-10分钟。
9.在每个离心管中加入1mL无KJ素的SOC或LB培养液，混匀后置37℃水浴保温1小时以便让抗性基因表达,否则将没有转化子生长。
10. 将溶液充分吹打混匀后分别取30-200μl分别涂于含相关的KJ素的培养盘上，剩余溶液Z好留4℃待用。
11. 37℃ 16-24小时培养，阴性对照盘上不应有任何落菌，否则可以判断操作中有污染或培养基中KJ素浓度不够。使用质粒转化的阳性对照100μl涂盘一般能有上千个菌落。连接样品转化所得菌落数将取决于连接反应效率等多种因素，100μl的涂盘一般有几十到几百个转化子。

使用效果：

左图是用10 ngClionG载体转化10个E.coli Tg1菌落后得到的转化子。右图是用3μL连接液(ClionB载体+1 Kb DNA片段,10μL反应体系)转化10个E.coli DE3菌落后37℃过夜保温得到的转化子。涂盘量均为200μL。

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