C端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白) 克隆与表达

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名称：C端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白) 克隆与表达
英文名：C-BFP plasmid（with CMV promoter）
编号：YT463
产地：国产|进口
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含BFP(蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以GX启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个BFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用BFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似，可以尝SYGFP抗体检测BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。


本质粒的主要信息如下：

 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Multiple cloning site	651-740
BFP	741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site	1510-1531
SV40 polyA signal	1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication	2064-2370
bla promoter	2395-2519
SV40 promoter	2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3704-4162
pUC origin	4291-4958

本质粒(5010bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。

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·RIPA裂解液(强中弱套装)
编号：YT612
英文名称：RIPA Lysis Buffer Set
规格：共150ml
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强中弱套装)含有RIPA裂解液(强)、RIPA裂解液(中)和RIPA裂解液(弱)各50ml，便于实验时探索不同的实验条件。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

产品组份：
RIPA裂解液(强)————50ml
RIPA裂解液(中)————50ml
RIPA裂解液(弱)————50ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

·STAT5凝胶迁移探针(10μM)
编号：YT259
英文名称：STAT5 Probe For EMSA(10μM)
规格：30μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的STAT5 consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的STAT5结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

STAT5 consensus oligo的序列如下：
5"-AGA TTT CTA GGA ATT CAA TCC-3"
3"-TCT AAA GAT CCT TAA GTT AGG-5"

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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