恩诺沙星酶联免疫定量检测试剂盒

【类别】   食品安全试剂盒
【品Pai】   钰博生物/Ybscience
【用途】   仅供科研使用，不得用于临床检验。
【规格】   96T/48T
【实验方法】   定量检测( 竞争法)
【发货周期】   现货
【参考价格】   询价
【产品详情】  
【检测原理】：本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测蜂蜜、动物组织（鸡肉、猪肉、鱼、虾）、牛奶、奶粉和鸡蛋等样本中的恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的恩诺沙星和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗恩诺沙星抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含恩诺沙星含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中恩诺沙星的残留量。
                          
【实验方法】：竞争法ELISA（定量）                     

【样本类型】：组织、蜂蜜、牛奶、奶粉、鸡蛋等样品。
                                               
【规格型式】：96孔板                                  

【保存条件】：试剂盒未拆开，2-8℃保存。      

【有效期】：6个月。                                              

【灵敏度】：0.1ppb(ng/ml)                          

【检测下限】：
组织（鸡肉、猪肉、鱼、虾）…………0.3ppb 
蜂蜜 ……………………………………0.4ppb 
牛奶 ……………………………………3ppb 
奶粉 ……………………………………6ppb 
鸡蛋 ……………………………………3ppb 
                         【样本回收率】：
组织、蜂蜜、牛奶、奶粉、鸡蛋……85%±15% 

【组织、蜂蜜、牛奶、奶粉、鸡蛋等样品处理方法】：                                   
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 动物组织（鸡肉、猪肉、鱼、虾）处理方法
1）称2.0±0.05g 均质过的组织样本于50ml离心管中；
2）加入8ml样本提取液（配液2），振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
3）取2ml清澈上层有机相至洁净干燥的10ml玻璃试管中，50-60℃水浴氮气吹干；
4）加入1ml正己烷，振荡2分钟，再加1ml复溶液（配液3），振荡30秒，室温4000转/分离心5分钟；
5）去除上层正己烷，取下层水相50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：2    
检测下限：0.3ppb
5.3.2 蜂蜜处理方法
1）取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯离心管中，加6ml样本提取液（配液2），振荡5分钟，使其充分溶解；
2）加入3ml复溶液（配液3），加入11ml二氯甲烷，振荡5分钟，室温4000转/分，离心5分钟；
3）吸去上层，取下层有机相8ml至干燥溶器中，50-60℃水浴氮气吹干；
4）用1ml复溶工作液溶解干燥的残留物，再加入正己烷1ml混合30秒，室温3000转/分以上，离心5分钟；
5）去除上层取下层50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：2    检测下限：0.4ppb
5.3.3 牛奶处理方法：
1）取25µl样本液与475µl复溶液（配液3）混合，振荡1分钟，使其充分溶解；
2）取50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：20    
检测下限：3ppb
5.3.4 奶粉处理方法：
1）称取0.5±0.02g均质物至10ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml去离子水，振荡，使其充分溶解；
2）取100µl样本液与400µl复溶液（配液3）混合，振荡1分钟；
3）取50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：50    
检测下限：6ppb
5.3.5 鸡蛋处理方法：
1）称取1.0±0.02g均质物至10ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml去离子水，振荡，使其充分溶解；
2）取100µl样本液与400µl复溶液（配液3）混合，振荡1分钟；
3）取50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：30    检测下限：3ppb

【结果分析】：                                   百分吸光率的计算
 标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以，即百分吸光度（%）= A/A0 ×
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值标准曲线的绘制与计算以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。   

【注意事项】：                              
1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。
4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。
       
【需用户自己提供的实验器材和试剂】：                                          1. 96孔读板仪器。
2. 自动洗板机.
3. 移液器和枪头。建议使用多通道移液器/排枪。
4. Eppendorf 管。
5. 额外洗板缓冲液 (neutral PBS 或 TBS。试剂盒内提供足量。如需额外缓冲液可参考如下配方)。
0.01M TBS: Add 1.2g Tris, 8.5g Nacl; 450μl of purified acetic acid or 700μl of concentrated hydrochloric acid to 1000ml H2O and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.0.01M PBS: Add 8.5g sodium chloride, 1.4g Na2HPO4 and 0.2g NaH2PO4 to 1000ml distilled water and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.*样品准备的相关试剂也不含在试剂盒中。